Faktor Leiden

Kao što je prije navedeno, gen abnormalnost koagulacijskog faktora V G 1691>A otkrivena u 1994 od strane R. Bertinom et al. Jedan od supstitucije gvanina na adenin na položaju 1691 (1691 g>A) u eksonu 10 F5 gena uzrokuje molekulsku defekt koagulaciju faktora V. Zbog zamjena na položaju 506 od molekule proaktselerina arginina u glutamin (Arg506Gln) poremećena svoju sposobnost urušavanje, što je rezultiralo formiranjem disfunkcije C. sustava antikoagulans proteina i tendenciju recidiva trombozu. Genetske abnormalnosti koagulacijskog faktora V (Leiden) je najčešća krvnih defekt u Europskoj populaciji.

Za otkrivanje genetskih abnormalnosti ostvarenjima pomoću PCR. Osjetljivost i specifičnost PCR pružaju in vitro sintetizirana oligonukleotida komplementarna s odgovarajućom regiju gena humanog faktora koagulacije V.

Nedostatak jedinstvene nomenklature genetskih defekata izazvao široko rasprostranjena u suvremenoj znanstvenoj literaturi brojnim znakovima ove anomalije: F5: 1691 G>A, Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Leiden (leydenovskaya) i drugi.

Princip metode

Za identifikaciju polimorfnih alela u amplifikaciju gena F5 pomoću odgovarajuće dijelove gena pomoću PCR nakon čega je slijedilo određivanje amplifikacijskih produkata.

Reagensi i oprema

• Kontrolni uzorci s divljim tipom alela i mutirani tip alela.
• Utvrditi anomalije F5 1691 g>Korištene su A dva primera. Primer 1 (prednji primer) ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, primer 2 (reverzna početnica): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Thermocvcler i druge opreme za obavljanje PCR.

Uzorci krvi za studije za istraživanje materijala može biti bilo koji izvor DNK, već se koristi više venska krv, koja uzima u epruvete koje sadrže EDTA. Uzorci su pohranjeni prije studije na temperaturi 2 ° ... + C 8 do 24 sata. Long spremljeni uzorci mogu biti samo u smrznutom stanju pri temperaturi od -40 ° C ... 70

Izolacija DNA iz uzoraka kliničkih materijala može se provesti različitim postupcima, na primjer upotrebom pribora na bazi silikona, postavlja mikrocentrifugi stupaca skupova na temelju ekstrakcijom fenol-kloroformom i drugi.

Metode određivanja

Metoda se temelji na kopija DNK području biračkog višestruko pomoću in vitro enzima. Napredak u istraživanju mora zadovoljiti odabrane opreme i postupak za PCR analizu (gel elektroforeze, flash i slično.).

VIDEO: Nizozemska, Noord-Holland. Part1. 06-2011

Evaluacija rezultata studija

Evaluacija rezultata vrši se na način koji omogućuje zamjenu polimorfnih oligonukleotida doma. Primjer predočiti rezultate pojačanje prikazan na slici. 5.1.

Video: Sve gradove i zemlje svijeta na jednom mjestu

Izvedbe leydenovskoy anomalija rezultata detekcije gena faktora zgrušavanja V sljedeće: G / A - oblik heterozigota anomalije kod položaja 1691- A / A - homozigotni anomalije. Populacija prevladava genotip G / G.

Interpretacija rezultata istraživanja

Prijevoznici leydenovskoy F5 genske abnormalnosti su skloni tromboze, što znatno povećava rizik u trudnoći, korištenje oralnih kontraceptiva, u postoperativnom periodu, i dr. Gene pojavnosti je nepotpuna, dakle, broj prijevoznika nema povijest trombotskih poremećaja. U ovoj izvedbi je prisutnost homozigotni učestalost mutacija i težini tromboze gore. Detekcija heterozigotna učestalost anomalija, prema literaturi, je oko 13% u populaciji.

Supstitucija aminokiselina na položaju 506 daje cijepanja molekule koagulacijskog faktora V aktivirani protein C, što značajno smanjuje stopu degradacije. Stoga, prisutnost gena anomalija F5 G 1691>Otpornost uočeno faktora koagulacije Va prema aktivirani protein C.

Otkrivanje ovog mutacije u bolesnika s recidivom trombozu omogućuje opravdavaju produljenje antikoagulantne profilaksa. Takva studija može pomoći identificirati pojedince koji trebaju odlučiti o korištenju antikoagulansa u provedbi operacije.

Video: Dr. Elena Berezovskaya - trombofilije i trudnoća

Uzroci pogrešaka

• Pogreške pre-analitičke faza istraživanja (suprotno vremenu skladištenja ili nepravilnog prijevoza biomaterial nukleinske kiseline mogu razbiti, što uzrokuje lažno negativan results- heparin može inhibirati PCR, tako da uzorci krvi ne smije se provoditi u epruvete koje sadrže heparin).
• Kontaminacija uzorka strano biološki materijal.
• Povreda načela prostornog uređenja laboratorija za molekularno genetičke studije.
• Odbijanje studij negativnu kontrolu.
• Odbijanje re-analiza pozitivnih uzoraka.
• Neuspjeh tehnikama izolacije DNA.
• Specifičnost i osjetljivost za PCR u osnovi ovise o strukturi, tako da upotreba primera od različitih proizvođača može uzrokovati dobivanju različite rezultate.

Ostale analitičke tehnike

PCR varijante utvrđeno da je pouzdan laboratorijski postupci, sposobne za pružanje visoke osjetljivosti, specifičnost i ponovljivosti. U većini slučajeva krvnih za dijagnosticiranje stanja povezanih s oslabljenom proaktselerina inaktivacija se može koristiti postupkom koagulacije određivanja rezistencije na aktivirani protein C, međutim, napomenuti da se druge poremećaje (hiperprodukcija Antihemophilic globulin, VA et al.) Su također u mogućnosti izazvati rezistenciju koagulacije faktora V u aktivirani protein C.