Gen anomalija protrombin 20210 g / a

U obiteljima bolesnika s tromboze otkrivenih autosomno dominantno nasljednog F2: 20210 G / A.

U trenutno povezani s ovom genetskom anomalijom s prekomjernom protrombina. Međutim, bez obzira na tehničke sposobnosti da utvrđuje povišene razine protrombina, otkrivanje ove bolesti treba temelji isključivo na PCR podacima visoke osjetljivosti i specifičnosti PCR pružaju in vitro sintetizirana oligonukleotida komplementarna na odgovarajući dio gena humanog protrombina.

Princip metode

Za identifikaciju polimorfnih alela u amplifikaciju F2 gena pomoću odgovarajuće dijelove gena pomoću PCR s naknadnim detekciju pojačanje proizvoda.

Reagensi i oprema

• Utvrditi anomalije F2: 20210 G / A koristi se slijedeći praymerypraymer 1 (prednji primer) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (nukleotida 20035-20054) - 2 početnicu (reverse primer) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (nukleotidi 20229- 20.211).
• Kontrolni uzorci s divljim tipom alela i mutirani tip alela.
• Thermocvcler i druge opreme za obavljanje PCR.

Uzorci krvi za studije istraživanje materijal može biti bilo koji izvor DNA, ali još venska krv koriste, koja uzima u epruvete koje sadrže EDTA Uzorci su pohranjeni prije studije, na temperaturi od 2 ... + 8 ° C do 24 sata. Uzorci se pohranjuju Long može se zamrznuti na -40 ..- 70 ° C.

Izolacija DNA iz uzoraka kliničkih materijala može se provesti različitim postupcima, na primjer upotrebom pribora na bazi silikona, postavlja mikrocentrifugi stupaca skupova na temelju ekstrakcijom fenol-kloroformom i drugi.

tehnika izvedba

Metoda se temelji na kopija DNK području biračkog višestruko pomoću in vitro enzima. Napredak u istraživanju mora zadovoljiti odabrane opreme i postupak za PCR analizu (gel elektroforeze, flash i slično.).

Evaluacija rezultata studija

Procjena rezultata se provodi na način koji omogućuje da se vizualizirati oligonukleotidne polimorfna supstituciju. DNA fragmenti se odrediti pomoću različitih fluorescentnih boja koja se specifično vežu na DNA.

Interpretacija rezultata istraživanja

Za mnoge nosače polimorfizma karakteristika različitih lokalizacija tromboze, rizik koji povećava značajno u prisutnosti trudnoće, korištenja oralnih kontraceptiva, u postoperativnom periodu, i drugi. Nepotpune pojavnosti gena, u tom smislu, neki prijevoznici nemaju povijest trombotskih poremećaja. U prisustvu ovog polimorfizma varijante homozigotni dobi od prve epizode je manje, i učestalost i ozbiljnost tromboze gore. Učestalost heterozigotnih otkrivajućim anomalija u literaturi, je oko 1-2% u populaciji. U prisutnosti F2: 20210 G / A razine protrombinsko u bolesnika oko 1,5-2 puta većim od normalnog.

Utvrđivanje tog anomalija protrombinskog gena u bolesnika s ponavljajućom tromboze potkrijepiti omogućava produljenje antikoagulantna profilaksu. Takva istraživanja pomažu identificirati trudnice s povećanim rizikom od tromboze.

Uzroci pogrešaka

• Pogreške prethodno analitički faza studije (u suprotnosti s uvjetima skladištenja ili nepravilnom transport biomaterial nukleinske kiseline mogu razbiti, uzrokujući lažno negativnih results- heparina može inhibirati PCR reakcije, tako da su uzorci krvi se ne mora provoditi u epruvetama koje sadrže antikoagulanta).
• Kontaminacija uzorka strano biološki materijal.
• Povreda načela prostornog uređenja laboratorija za molekularno genetičke studije.
• Odbijanje studij negativnu kontrolu.
• Odbijanje re-analiza pozitivnih uzoraka.
• Neuspjeh tehnikama izolacije DNA.
• Specifičnost i osjetljivost za PCR u osnovi ovise o strukturi, tako da upotreba primera različitih proizvođača može uzrokovati različite rezultate.

Ostale analitičke PCR tehnologija razni oblici smatraju se pouzdanim laboratorijske postupke u mogućnosti pružiti visoku osjetljivost, specifičnost i ponovljivost. Unatoč postojanje tehničkih mogućnosti identificirati povišene razine protrombina, dijagnostikom tromboembolije treba se temeljiti isključivo na korištenju PCR varijanti.