Indirektni dijagnoza genetske bolesti. Točnost molekularnu dijagnostiku mogućih izvora pogreške.

Neizravni (indirektni) pristup molekularne dijagnostike povijesno je ranije i univerzalna. Ona se temelji na analizi intra- i vnegennyh polimorfnih mjesta. Jer one inače viri kratki DNA-sekvencu istih homolognih kromosoma područja koje se razlikuju u primarnoj strukturi. Ovi dijagnostički polimorfnih mjesta mogu se nalaziti bilo unutar samog gena ili u neposrednoj blizini.

Nužan uvjet za neizravne dijagnostiku DNA To je prisutnost u obitelji bolesnog djeteta ili prilika za proučavanje njegova DNA (krvne mrlje, histoloških preparata i sl.) Uspostava sadržaj informacije uključuje identifikaciju polimorfnih stranice, koji se mogu koristiti kao molekularni marker za diskriminaciju i oba mutantnog normalnom alelu. U slučaju bolesti autosomna recesivna roditelji će heterozigotne za genotipa pacijenta, a - homozigot jednog alela markera. To heterozigotnost za molekularne polimorfizama definira informacijski sadržaj pojedinog visokog rizika obiteljske rođenja djeteta s genetskim bolestima. Ovisno o distribuciji marker alela na homolognih kromosoma pacijenta i njegovih roditelja obitelji može biti potpuno informativan za DNK dijagnostike djelomično informativnih ili uninformative.

Bitno je analizirati obitelji visokog rizika je broj polimorfni mjesta od jednog gena, kako bi se utvrdilo točno bilo specifično alel naslijeđen mutiranog gena, i da obitelj u potpunosti je korisno za buduće PD.

točka Prednost neizravne metode - Mogućnost DNK dijagnostike bez točnu identifikaciju mutacija gena, čak iu nedostatku točnih podataka o identifikaciji i kloniranje mutirani gen. Njegov značajan nedostatak je nemogućnost postavljanja dijagnoze u odsustvu bolesnog djeteta (ne može točno odrediti koji polimorfni aleli povezani mutiranog gena), pogreška u dijagnozi zbog mogućnosti prelaska preko tijekom mejoze i nošenje polimorfna stranice na zdrav alela.

Točnost molekularne dijagnostike, mogućim izvorima pogrešaka

U obavljanju dijagnostika molekulskim postupcima važno je imati na umu dvije glavne izvore pogrešaka:
- onečišćenja uzorka fetalne stanice majke;
- mogućnost prelaska preko prilikom korištenja neizravne metode.

S obzirom na vrlo visok osjetljivost metode PCR, važno je da se izbjegne kontaminacija uzoraka fetalnih tkiva matične stanice. Čistoća uzorka za analizu može postići samo BP pažljivim odabirom placentnog korionskog resica ili pod binokularnim povećalom, nakon čega slijedi ispiranje s fiziološkom otopinom. To je posebno važno kako bi se spriječilo majčinsku kontakt krvi u slučaju fetusa uzorkovanja kabel krv po cordocentesis. Visoka kvalifikacija liječnik-operatora i korištenje kvalitativnih reakcija identificirati majčinske krvi nečistoće izbjegli ovu komplikaciju. Rizik takvih dijagnostičkih pogrešaka može značajno bp umenshen prilikom rada u sterilnim uvjetima.

Pouzdanost molekularne dijagnostike izravnom metodom, tj identificiranjem mutacije u genu je vrlo visoka i približava apsolutna. Međutim, s obzirom na cijeli niz mogućih promjena u genomu tijekom sazrijevanja spolnih stanica (Crossing-over), te u ranoj fazi embriogeneze (mutageni učinak) je točniji dijagnostički indeks 99.9%. Znatno teže procijeniti rezultate molekularne dijagnostike neizravne metode. U slučaju registracije intragenski polimorfizama točnost neizravna dijagnoza je vrlo visoka, jer je količina vnutritennogo crossover obično ne više od 0,1% za većinu poznatih gena.

Izuzetak mogu biti samo relativno velike geni, kao što je gen distrofin hemofilije A, neurofibromatoza, i drugi. Tako, u slučaju distrofin brzine misdiagnosis može biti i do 2%, što odgovara visoke frekvencije crossover vnutritennogo (oko 2%) u ovoj Div gena (2,2 milijuna bp). Također je važno uzeti u obzir stupanj pacijentovih rođaka i očekivanih koji provodi AP. Količina mogućih povećanja pogreške ako marker alel nije određena u srodne voće, a svojim drugim rođacima. Posebno treba pažljivo procijeniti rezultate neizravno dijagnozu pomoću vnegennyh polimorfna lokusa. Smatra se da je s povjerenjem provesti AP u tim slučajevima može biti samo istovremena ispitivanja nekoliko polimorfnih mjesta bočni mutirani gen. Obično koriste za dijagnostičke markere molekulske, učestalost rekombinacije što mutirani alel manje od desetine ili stotinki posto. DNA polimorfizmi karakteristične sekvence primera za PCR, ili neizravne metode vrijednosti pogreška za različite bolesti dijagnosticirana prenatalno su sumirani u mišljenja i monografijama.