Hibridizacija mRNA i DNA antitijela. Lokalizacija V- i geni u genomu imunoglobulina

U pokusima na hibridizacija različiti mRNA i DNA, posebno rano obično dobije dvofaznu krivulju sa prijelazne zone u jednom području i drugi nisko - na visokim vrijednostima Cot4l.

Koristi za tlačenje hibridizacija neobilježenog mRNA, kodiranje L lanac homologni ili heterologni C-regija je već dopušteno da se utvrdi da visoke vrijednosti zbog hibridizacije Cotih C gena i da se broj tih gena ne prelaze dva - četiri po haploidne genoma. Prisutnost na području s niskim vrijednostima Coth dijelova istraživače smatrati kao dokaz značajnog broja „germinalnih» V-gena. Međutim, povećanje čistoće pripremama mRNA i korištenja fragmenata mRNA, sadrži i poliA sekvencija pokazala da su V-geni su jedinstveni, i da su oni prikazani u genomu u iznosu koji ne prelazi dva ili tri kopije u posljednjih nekoliko godina.

Razmislite primjer podataka hibridizacije pokusi na mRNA, kodira sintezu X-L-lanac mišjeg mijeloma MOPC 104E s DNA iz jetre (myshn Matthyssens npr. a., 1976). Na temelju podataka o primarnoj strukturi V-regije svih trenutno istražuju lanca lambda miševa (18 uzoraka) podijeljeni u sedam podskupine. Ako za svaku V-regije postoji posebna V-gen, mora se otkriti 7 V-gena u mišjem genomu. U stvari, njihov broj ne smije biti manja od 145 (u ovom stanju, vjerojatnost otkrivanja sedam različitih podskupina u istraživanju ukupno 18 uzoraka je povećana za 90% - u 50% vjerojatnosti broja V-gena mora biti barem 25). Hibridizacija je određena iz krivulje koja V-gen za L lanac MOPC 104E ponavlja u genom ne više od 2-3 puta. U isto vrijeme, stupanj homologije s dvije mRNA koja kodira sintezu dvaju lambda lanci, čak i pripadaju dvije različite podskupine (MOPC 104E i Nors 2020), vrlo velike. Ekstrapolacije tih podataka na ostatak mRNA koja kodira lambda lanca, može se zaključiti da je ovaj sličnosti između V-područja ovih lanaca L-mRNA MOPC 104E bi gnbridizovatsya sa svima njima, te stoga vrijednosti Cot bi morao biti znatno niža nego što je definirano u eksperiment (više ponavljanja, to je niža vrijednost Cot ,,,). Ovi podaci ukazuju, dakle, u odnosu na prisutnost u genom velikog broja V-gena i stoga u korist somatskom mutacijom kao primarni čimbenik, pruža različite antitijela (imunoglobuline).

Valja, međutim, napomenuti da Postupak hibridizacija To je vrlo komplicirano i, očito, ne dopušta da se jasno interpretirati rezultate. Tako, za razliku od gore opisanih pokusa, korištenjem cDNA za V i C-domene u odvojeno (cDNA i kDPKs) pronađeno hibridizacije kDNKu visoku specifičnost za mRNA (Smith, 1977- Stavnezer, Bishop, 1977). Nađeno je da vrijeme kDNKs jednako hibridizira sa svim mRNA koja kodira za tip kapa L lanac kDNKu reagira samo s kapa homolognom mRNA. To pokazuje da je broj V-gena određuje hibridizacije može biti manja.

U isto vrijeme, metoda hibridizacija To se pokazalo vrlo korisno za proučavanje lokalizaciju V- i C-gena u staničnoj genoma. Nedavno, ova metoda je mogao pokazati somatsku reorganizacija genima V-i C-regiju imunoglobulina. Pokazano je da u embrionalnom miša genoma V- i C-gsny odvoji, dok se u tumoru (plazma-uš MOPC 321, Nors 2020. godini), koji su smješteni u blizini (fuzionirani).

krivulje mRNA hibridizira s DNA, dobivene iz jetre i stanica mijeloma, gotovo su istovjetne. To znači da se u stanicama koje proizvode imunoglobulina nema pojačanje gena koji kodiraju njih.

Dakle, u današnje vrijeme pronađen, genom koji ima 2 ili 3 gena koji kodira V-regije lambda lanci, 2 ili 3 gena koji kodira V-regije kappa lanca i 2-4 gena koji kodira za C regiju L-lanaca.

Prvo, ne postoji Spoj V i C-geni, tada taj dio DNA plus 200-450 neprevedenih nukleotida transkribirane u mRNA koja se nakon dolaska do kraja 200-3` polyA nukleotid transportira u citoplazmu i uključen je u polyribosomes, koji kodira sintezu prekurzora polipeptidnih lanaca imunoglobulina.

Nakon odcjepljenja prekursora ekstrapeptidov (A možda i prije), započinje skupom imunoglobulinskih molekula, prijenos mikrosomalnih ih u vrećice i bilo izlučivanja ili ugradnjom u staničnoj membrani.