Geni sintezu antitijela. Broj gena koji sudjeluju u sintezi imunoglobulina

primarna istraživanja struktura i genetika imunoglobulina To je dovelo do zaključka da svaki nolipeptidnaya lanac kodiran s barem dva gena: V-gena odgovornog za varijabilne regije i C gepami odgovoran za konstantne regije molekula. Broj oba gena u genom stanica je od temeljne interesa. Činjenica da je promatrana raznolikost antitijela različitih autora, objasnio je bilo u smislu „klica” teorije gena, prema kojoj je u genom skupa gena za sve poznate V-domene, tj. E. mnoge tisuće V-gena, bilo sa stajališta teorije somatske mutacije pri čemu skup V-gena unutar genoma je ograničen, i razne strukture imunoglobulini (antitijela) nastaje kao rezultat somatskom mutacijom. Tu je i kompromis gledišta. Sve ove ideje iscrpno raspravlja da postane vođa i koautori (Leder e. A., 1974), tako da više detalja nećemo ih zaustaviti.

Umu da AE Gurvitch i R. S. Nezlin (1965) je napravljen izvorna pretpostavka da se pojedinačni dijelovi genoma koji kodiraju protutijela i aktivne centre i da L-II-i DITS „žetvu” manjih, koje se neovisno sintetizirati lanaca. Izuzetno je zanimljivo da se nakon pet godina, ove ideje ponovno pojavila u obliku hipoteze o „provedbu» ( «umetanje») informacije kodirane polinukleotidima od malog (oko 30-45 nukleotida), čime se osigurava dostupnost CDR u H i L lanca (Wu, Kabat, 1970).

konačni odgovor na ova pitanja, Očito, to može samo osigurati izravan određivanje V- i C-gena u genomu. Izolacija mRNA pripravaka s visokim stupnjem čistoće odgovarajućih ostavljena eksperimente start. Pristup je razvio niz godina, je odrediti broj gena RNA-DNA hibridizacija. Budući da je struktura mRNA strukturu transkripciji potpuno komplementarni dio DNA, taj postupak se može odrediti broj gena, a da se odredi se postoji li njihovo pojačanje (razmnožavanje) za indukciju sinteze imunoglobulina.

Trenutno, istraživanje ova vrsta se provode s mRNA, Još nije dobivena kodira sintezu L-lanaca su dovoljno čiste pripravke N-mRNA. Bitan uvjet za provođenje te eksperimente je, kao prvo, da je čistoća priprave mRNA i visoke specifične aktivnosti, i drugo, u prisutnosti vrlo velikog suviška DNA. Dobiti vysokomechenye mRNA lijekova je teško. Obično je to učinjeno upotrebom mRNA izolirana NT stanicama kultiviranim u prisustvu visokih doza ili 32P-3H- predshsstvennikov ili više - mRNA obilježenim 125I in vitro (Farace EA, 1976- Matthyssens e a, 1976, ....). Tu je i neizravan verzija metode. Što se sastoji u tome, na prvo reverzne transkriptaze na mRNA dobije matrica vysokomechenuyu komplementarne DNA (cDNA), a već je korišten za hibridizaciju na staničnu DNA (npr. A. Schechter, 1976- Storb npr. A., 1976).

Pročišćeni mRNA ili cDNA hibridizirana denaturirani određenim uvjetima (ultrazvukom) ili DNA iz jetre mišjeg mijeloma NS stanica i postotak vezanog RNA (ili cDNA), kao funkcija vremena hibridizacije. (Određivanje se temelji na stabilnosti hibrida u RNaza učinka). Pod ovim uvjetima, postotak hibridizirane RNA (cDNA) (f) ovisi o koncentraciji RNA (cDNA) (Ro), koncentracija DNA (C) i vrijeme inkubacije (f). Uz vrlo veliki višak DNK ne ovisi o f R0, a ovisi samo o C „i t (ležaj). Količina Cot, pri kojoj je 50% hibridizacija, očito ovisi o stupnju komplementarnosti DNA i mRNA (cDNA).

stupanj podudarnost dviju mRNA (I stoga je njihova V- ili S-gen) se određuje u Kompetitivna inhibicija pokusa hibridizacije obilježenog priprema mRNA neobilježenih lijekova homologne i heterologna mRNA, ili izoliranjem DNA iz nastalog hibrida, a hibridizacije s drugim obilježenim homolognih i heterolognih mRNA. Uspoređivanje tih rezultata s podacima o primarnoj strukturi onih polipeptida koje kodiraju mRNA ispitivanih, što se može vidjeti da li je krivulja definiran frekvencije ponavljanja hibridizacije gena s procijeniti iz podataka o homologije V- i C-domene.