Metode za izolaciju polyribosomes. Dimenzije polyribosomes sintetizirati antitijela

Trenutno, istaknuti polyribosomes iz limfnog tkiva i mijeloma tumori obično koriste svoju homogenizacija u Tris pufer otopine (pH 7,0-7,6) koji sadrži saharozu, KCl (ili manje - NaCl), MgCl2 (ili magnezijevog acetata) i bilo koji od inhibitora RNase (češće - heparina). Preduvjet je korištenje reagensa koji ne sadrže RNA-ze. Prvo ukloniti iz homogenata jezgre i mitohondrije postmitochondrial supernatant je dodano na bilo koju od detergenta (natrij deoksikolatu ili Triton X-100) se otopi enodoplazmaticheskogo retikulum membranu i istaloženi polirobosomy (ili frakcionirana) u koraku (0,5-1,5 M) ili ravni (obično 15-30% otopina) saharoza gradijenti. Prinos poliribosomnogo materijal u ovom slučaju 30-50% svih staničnih ribosoma.

Stupanj Male polyribosomes, dobivenih iz raznih izvora utječu na saharozu koncentraciju, ionska jakost i pH otopine pufera omjer koristi K / Mg i prirodu detergenta. Prema tome, za polyribosomes iz slezena povoljnom koristiti Triton X-100, kao i u prisutnosti natrij deoksikolatu navedeno za njihovu degradaciju. U nekim slučajevima to je također preporučeno dodatkom malih količina SaS12 ili spermidinom povećavaju stabilnost stanične jezgre (Goryunova i sur., 1974- Zid e. A., 1977), i 2-merkaptoetanola (Schechter, 1973). Kako bi se smanjilo vrijeme kontaktne polyribosomes iz staničnog lizata može se izravno primijeniti na stanice koje sadrže inhibitor deterdženta izravno na laminiranu saharoznom gradijentu. U ovom slučaju, za vrijeme centrifugiranja kletkp istovremeno lizirane i frakcioniraju (Davis npr. A., 1969).

Treba napomenuti da izolaciji porijeklom polyribosomes stanice limfnog tkiva normalnog ili imuniziranih životinjskog tkiva je mnogo složenije i manje razvijenih postupak od njihovog odvajanja od plazmacitome. Možda je to zbog činjenice da postoji plazmacitoma endogeni inhibitor 'RNA, dok je u slezeni i limfnim čvorovima, to nije slučaj, i RNaza aktivnost u imunizacije čak i povećava.

znatan uloga, očito ima neku vrstu životinje. Najpovoljniji objekti, red podaci iz slezene i limfnih čvorova iz štakora, iz kojih je moguće dobiti izvornih polyribosomes, taloženjem na 250-350S i 160-190S sadrži aktivnu puls i aminokiselinsku oznaku (Vassalli, 1967- Vasil i sur., 1969). Također postoje izvještaji o raspodjeli izvornih polyribosomes iz slezene kunića (Becker, Rich, 1966- Scharff, Uhr, 1965) i zamoraca (Nikolaeva, 1976). Zbog tumorskih tkiva najbogatije izvor polyribosomes su limfomi u mielomy- manji broj ovih organela (Sherr, Uhr, 1971a).

Kao rezultat toga, poboljšanja frakcioniranje tehniku limfna tkiva životinja stanice i glodavaca plazmacitome uspjeli izolirati široku paletu polyribosomes s sedimentacije konstanti od 118.s do 350S. Pokazalo se da imunizacija iznos polyribosomes i pol do dva puta povećava (Moav, Harris, 1970- YUrin, 1971.), a njihova specifična distribucija postaje bifazični prirode. Slični podaci o stanicama mijeloma dobiveni su Schubert (Schubert, 1968) i kontakt (Sidorov et al., 1973).

Predloženo je da se dvoslojna distribucija polyribosomes, obilježene rastuće polipeptidnih lanaca odražavaju prisutnost dva razreda polyribosomes uključene u sintezi H- i L-lanaca. Pokusi sa imunoprecipitacijom sa polyribosomes antiseruma do H i L lanci zaista pokazalo se da je samo H lanac otkriven je polyribosomes 270-300S i L lanac - ponajprije u polyribosomes 180-190S (Shapiro ea, 1966a- Askonas, Williamson, 1967b ). Prema proračunima obavljaju autora takvi polyribosomes treba sadržavati mRNA, koji se sastoji od približno 1250 nukleotida i 500, tj. E. Vrlo pogodne za kodiranje sintezu H- i L-lanaca.

Dobiveni su podaci dva fundamentalno važni zaključci, i to: 1) sinteza imunoglobulina monotsistronnyi priroda i 2) veličina polyribosomes i mRNA koji su uključeni u tvorbu H- i L-lanaca, su dovoljna da kodira sintezu svakog od njih u cijelosti.