MRNK je uključen u sintezu antitijela. Metode studiranja mRNA

trenutno, dva pristupa - kemijski i imunokemijska. Prvi se temelji kemijski frakcioniranje mRNA izolirana iz stanica koje stvaraju imunoglobulina. Glavni koraci: odabir mislomnyh stanica ili mikrosomalnih polyribosomes vezanih na membranu (Stavnezer EA, 1971- 1972 i e Milstein ....) - ekstrakciju RNA iz njih pod uvjetima koji ih sprječavaju degradatsiyu- gradijenta gustoće RNA frakcioniranje saharozy- izbor frakcije koje odgovaraju veličini pročišćavanja namijenjen mRNA kolonskom ribosomske RNA s oligo ((1T) - ili poli (u) celuloze (ili sefaroza), samo bogati kašnjenje adennlovymi baze mRNA (poliA mRPK), a studija biološke aktivnost posvećena IP dionice.

U nekim slučajevima, dodatno pročišćavanje pripravci mRNA koristi polnakrplamidnom elektroforeza gel u prisutnosti 99% formamidu (Farace npr. a., 1976- Matthyssens s, a., 1976). S tim i drugim varijacijama gornjoj shemi trenutno u upotrebi od strane velike većine istraživača. Prinos pojedinca polyA mRNA obično je 0,01% od količine RNA (uvedene Brownlee npr. A., 1973). Kao rezultat toga, trenutno pridruženog NZ plazmacitome MOPC 70E, MOPC 21, 41 MOPC nekoliko mRNA koja kodira oba H i L lanac. Čistoća većine tih lijekova ne prelazi 40-60%.

Samo jedna skupina autori Nedavno je uspio na takav način da se dobije mRNA za više od 90% -tne čistoće (Matthyssens npr. a., 1976). To i ne čudi. Metoda koja se koristi se temelji, kao prvo, na razdvajanju RNA molekula prema molekulskoj težini, i drugo, u odjelu populacije napaja sadržavao RNA oduzeta od njega.

Naravno, stanice mogu imaju brojne mRNA sa sličnim nekretnina koje se ne odnose na imunoglobulina. Sve to neminovno će zagaditi RNA pripreme pojedinog imunoglobulina RNA. Očito, to će biti veći ili manji, ovisno o relativnom udjelu imunoglobulina sintetizirali stanicama tih nečistoća.

Dakle, za izolacija mRNA od mijeloma, sinteza imunoglobulina u kojoj je 30-40% sinteze svih proteina u cjelini, ova metoda može biti ispolzovan- istodobno kako bi se izolirao mRNA koja kodira sintezu imunoglobulina normalnih limfoidnim tkivima, naročito pripravak vrlo heterogenog stanica slezene jasno je da je neprikladan.

mnogo perspektiva, S naše točke gledišta, to je Imunokemijske pristup rješavanju ovog problema. Njegova prednost leži u činjenici da je već prvi korak frakcioniranje uključuje strogo određeni pojedinačni polyribosomes izbor pomoću protutijela na sintetizirani protein ovim polyribosomes. Postoje tri varijante ove metode. Podrijetla - taloženje polyribosomes antitijela sintetizirani protein u prisutnosti nosača, odnosno na isti protein (taloženja) .... (Delovitch i e, 1972-, Laskov Mitelman, 1975).

Drugo - obrada polyribosomes antitijela na protein sintetizirani njih i taloženja dobivene kompleks antiseruma s antitijelima (indirektno) za taloženje (Schechtcr, 1973, 1974a). I treći - vađenje pojedinačnih polyribosomes preko immunosorbents sadrže kovalentno ili nekovalentno povezani antitijela sintetizira na polyribosomes proteina (Sidorov et al, 1973. do Sidorova s, 1974- Lubimova et al, 1975, ...).. Iz tako dobivenog pojedini polyribosomes ili drugi polysomal RNA je ekstrahirana mRNA i uklonjen je propuštanjem smjese kroz stupac s oligo- ili poli (U) celuloze. Imunokemijske koristeći pristup uspješno u dobivanju mRNA Preparacije čistoće oko 95%.