Stabilizacija imunoglobulina hapteni. Ovisnost konformacije protutijela temperature

Postoje podaci iz različitih metode, ukazujući na povećanje stabilnosti protutijela i njihovih fragmenata Fab-proizlaze iz kompleksa s hapteni. Na primjer, dodavanje tih povećava stabilnost haptenskih molekula da denatiruyuschemu djelovanje gvanidin hidroklorida (Cathou, Werner, 1970), a na djelovanje kimotripsina (Grossberg npr. A., 1965).

IgM antitijela također stabiliziraju određene haptene s obzirom na proteolizu s subtilizina i kimotripsina (ASHMAN, Metzger, 1971). Pokazalo se da snižavanje osjetljivost na djelovanje proteaze IgM u potpunosti zbog promjene svojstava Fab-fragmenata. Prema našem modelu, ona pomiče komponentu A ravnoteža hapten i B Fab fragment utakmice.

Dakle, da objasni naveo dovoljno da ove rezultate da je slobodna energija je kompaktniji konformer Niži slobodne energije konformer B (t, npr. A-konformer stabilniji od B). Ako je tako, onda povećanje stabilnosti proteina ne bi trebao ovisiti o tome kako je odgovarajuće ravnoteže pomak uzrokovao.

Doista, pokazano je da smjene Ravnoteža lijevo spina-obilježenog dimeri lakih lanaca, simulirajući strukture Fab-podjedinica djelovanjem 1.2 M NaCl i 0.75 M (NH4) aS04 povećava stabilnost u odnosu na utjecaj temperature. Sličan pomak u ravnoteži između A i B konformera izaziva drugu Perturbacija strukturu proteina i njegovim hidratacija ljuske sredstvom kao što je natrijev dodecilsulfat i temperature.

zavisnost konformacijske stanje IgG temperatura detektira druge metode. Na primjer, G. i suradnici Troitskii (1971) i J. F. i suradnici Kiryuhin (1972) od strane optičke obrtne disperzije uočeno reverzibilna pH ovisne konformacijske promjene temperature prijelaza od 27 ° do 38 °. Nakon toga se pokazalo da u neutralnom pH području prijelazne temperature ne ovisi o izoelektrične točke IgG.

Međutim, kada pH, udaljena od izoelektrične točke kada je molekula IgG postane dovoljno velik vlastiti naboj, temperature prijelaza konformacijske potpuno izostaje (Troitsky npr. a., 1973). U VP Zavyalova i osoblje (Zavyalov npr. A., 1975) provedeno istraživanje višestrukih mijeloma konformacija proteina kao funkcija pH i temperature do optičke obrtne disperzije, kružni dikroizam spektroskopija uznemiravanje, elektrokemijska jodiranje i diferencijalne skenirajuće kalorimetrije.

Utvrđeno je da kada pH je promijenjen 6,0-6,5 Dostupnost kromofor skupinama smanjuje otapala. To može biti zbog promjene u broju nabijenih skupina u proteinu i smanjiti intermolekularne elektrostatičke sile odbijanja. Sličan je fenomen - zaštitni dio koji tirozin i triptofan ostataka (pH 7,35- 0,01 M fosfatnog pufera) -nablyudali s porastom temperature od 25 do 35 ° C, to se događa nakon vezanja na hapten dinitrofenil homologna antitijela kunića (IgG).

Ovi rezultati mogu se smatrati kao pokazatelj činjenice da je porast temperature i formiranje posebnih kompleksa s hapteni povećava njihovu kompaktnost, što je u skladu s brojnim radovima navedenim gore.