Imunoglobulin reaktivnost. Metoda spin označeni hapteni

Hsia i Little (Hsia, Little, 1973) istraživali su interakcije Dva spin-označene hapteni - DNP hidrazon Derivat N-1-oksi-2,2,5,5-tetrametil-3-pirolidinon (I) i M-1- (2,2,5,5-oksi-tetrametil-3-metilamino) 2 4-dinitrobenzena (II) s dva mislomnymi IgA - MOPC 315 i 460 kao EPR metoda, a da se smanji prinos kvantne fluorescencije proteina.

Utvrdio da je vezivanje hapteni I i II proteina MOPC 315 N-O-skupine u oba slučaja vrlo su imobilizirani stanje, ali dvije vrste imobilizirani komponente su promatrane u ESR spektru spoja II, za razliku od spojeva u rasponu od I. Kada se veže na protein MOPC 460 slobode rotacije N-O-skupinom spoja I također znatno smanjena, a na grupe spoja rotacija-N-O-II vezanje na ovaj protein ima mali učinak.

Međutim, sudeći po blizu smanjenje kvantnog prinosa fluorescencija na vezanje protein spin označeni hapteni i termodinamike proučavanje tog procesa, afinitet spojeva I i II, proteina MOPC 315 i 460 se malo razlikuje. Prema tome, stupanj imobilizacijsko N-O skupina spin-obilježenim haptena nisu u svim slučajevima karakterizira snagu kompleksa.

Prema autorima, razlike u imobilizacija Supstance I i II mogu biti uzrokovane dva razloga: 1) ligandi vežu na različitim mjestima kruta konformacijski aktivnog mjesta, 2) konformacija aktivnom mjestu može biti stabiliziran u različitim stupnjevima ovisno o razlikama u strukturi liganada.

u drugom Istražili smo uzroke, uzrokuje pojavu dvije vrste imobilizirane komponente u ESR spektra kompleks II proteina MOPC 315 Pokazalo se da je to zbog dva oblika enantomernymi spin-označene hapten II. N-O grupe formiraju ligand s označena manje hidrofobni mikrookoliš, a drugi - više hidrofobnih, što je rezultiralo u drugom položaju na imobilizirani komponente na osi jakosti magnetskog polja. Vežu odvojena enantomernyh oblici (spin-obilježenim DNP amini -) protein MOPC 315 (što rezultira pojavom samo jednu vrstu komponente.

Metoda spin označeni hapteni

Zamjena spin-obilježenim hapteni u aktivnih mjesta antitijela koristi homologni hapten E su Leutom iČlanovima (Leute npr. a., 1972), da se odredi koncentracija morfina u testne otopine. Ova metoda koristi učinak velikog povećanja visine EPR linija spektra spin-obilježenog morfina u tranziciji iz stanja imobilizirane na slobodni kao rezultat pomicanja aktivnog središta. Visina uske linije nestanu inhibicije spektra EPR obilježje u tom slučaju koncentracija morfina u testne otopine.

Donja granica osjetljivosti takav postupak 10-7M morfin (0,03 mg / ml). Nadalje, ovaj pristup je razvijen (Montgomery npr. A., 1975) i bio je korišten za određivanje koncentracije niza lijekova u serumu. Je pokazao 100 puta (osjetljivije od konvencionalnih metoda kemijske i posjeduju visoku specifičnost, za određivanje jednog relativno 50 ul seruma.

Hsia i suradnici koristili Kompleks DNF - metilen (N-1-oksil-2,2,5,5, tetrametil-3-metil-aminopirolidin-2,4-dinitrobenzen) sa mijeloma IgA (MOPC 315) kao modelni sustav za proučavanje reaktivnost proteina u odnosu na DFT i njegove analoge. Na iznos slobodnih aktivnih centara raseljeni iz spin-označene hapten je suditi prema intenzitetu EPR komponenti spektra vysokopolyyuy. Kvantitativne procjene dobivene ovom metodom su u dobrom slaganju s rezultatima ravnotežnom dijalizom. Predložena metoda je vrlo obećavajuće u imunokemijskih studija.
sljedeći zaključci o strukturi aktivnog mjesta antitijela može biti učinjeno na temelju dobivenih podataka.