Dijagnoza steroidnih hormona. metode

Video: Suvremene metode dijagnosticiranja i liječenja bolesti jetre

Za točno mjerenje malih koncentracije steroidnih hormona i njihovi metaboliti imunološka ispitivanja metoda pomoću kompetitivna inhibicija imuno taloženjem, ili radioimunotestom (RIA), koji je prvi put opisao Berson i Yalow 1960 .. Međutim, daljnji razvoj ove tehnike znanstvenici su suočeni s nekim teškoćama. Prvo, steroidi, neimunogeni, a imaju sličnu strukturu - ciklopentan-hapten jezgru s manjim varijacijama, što otežava proizvodnju specifičnih antitijela.

steroidi To može biti imunogeni, da im se pridruže hapten protein nosač, a razina antitijela može povećati prethodno imunizacije haptene. Međutim steroidni dio, na koji je konjugiran protein ima značajan utjecaj na specifičnost antitijela proizvedenih. Prema tome, antitijela generirana u serumskog albumina goveđeg konjugacija na položaju 19 pokazuju veću specifičnost u usporedbi s odredbama 3 ili 17 Za precizniju tumačenje klinički potrebno imati podatke o unakrsne reaktivnosti svakog antitijela je odabran za ovu analizu.
najviše tvrtke - proizvođači reagensa dati podatke o svojoj unakrsne reaktivnosti antitijela, ali oni nisu uvijek pouzdani i trebaju se provjeravati da laboratorij, koji će provesti analizu.

Drugo, visokog afiniteta vezanja proteini, naći u serumu, kao što su SHBG, natječu s antitijelima, a time se stvara buku za određivanje broja molekula steroida RIA. To dovodi do poteškoća direktno mjerenje, a potrebno je prethodno izvlačenje steroida s organskim otapalima i često je kromatografskog razdvajanja. Istovremeno, neke kemikalije, kao što je 8-anilinonaftalensulfonat su sposobni inhibirati vezanje steroida proteina, koja omogućuje da se mjerenje koncentracije steroida izravno bez prethodne ekstrakcije.

Video: Suvremene bezopasne metode dijagnosticiranja stopala i kralježnice ortopedicheskoym centar „Julianna”

Izravna analiza Potrebno je malo vremena i može biti automatiziran. U komercijalno dostupnim automatiziranih jedinice za određivanje koncentracije estradiola, progesteron i testosteron, koji se koriste u mnogim laboratorijima. Takvi testovi se, međutim, karakterizira niska osjetljivost, kao i za određivanje minimalne koncentracije - niska pouzdanost. U tom smislu, oni se ne preporučuje za primjenu u određivanju ekstremno malim koncentracijama hormona, kao što je estradiol u djece i muškaraca (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

problem može riješiti ekstrakcijom serumu heksana (volumni omjer 3: 2), nakon čega slijedi njegovo sušenje i smanjenje serumskog bessteroidnoy, koji se zatim podvrgava analizi u automatskom uređaju.

primjena plinska kromatografija u kombinaciji sa spektrometrijom masa (GC / MS) nadilazi mnoge od nedostataka imunoanalize i smatra se pouzdanim i točan postupak. Međutim, GC / MS se vrši u nekoliko koraka, uključujući ekstrakciju otapala, kromatografskom separacijom i kemijske tumačenje koje prethode Instrumentalna analiza, a osjetljivost GC / MS često manji nego nekih vrsta ispitivanja. Nedavno, ova tehnika je zamijenjen tekućinska kromatografija spojena s masenom spektrometrijom (LC / TMS), naznačen time višom osjetljivost i izvedbe u usporedbi s GC / MS.

Sada, ovaj novi tehnologija smatra mjerilo. LC / TMS je korišten za istovremeno mjerenje estradiol i estron razina u krvnoj plazmi, bez ljudske ukrižene. Ove tehnike mogu se preporučiti kao referenca i koristi se za normizaciju i odobrenje za imunološka istraživanja koja pružaju potrebne kliničke potrebe za jednostavnošću i visoke propusnosti.