Kriteriji kvalitete imuno hormoni

Ili metoda trebala bi biti specifičan, osjetljive, točne i imaju dobru reproduktivnost. Osim toga, metoda analize treba razvijati tako da je moguće izmjeriti razine hormona u serumu i pune krvi i plazme, a ponekad u urinu i slini (u slučaju, primjerice, steroidi). Još jedan važan kriterij - najmanji broj i maksimalna jednostavnost rada se obavlja laboratorijsko osoblje. Svi ovi kriteriji su dizajnirani do posljednjeg detalja do kraja 1960. Budući da će nekoliko primjedbi i komentara.

specifičnost

To je najvažniji pokazatelj kvalitete bilo koje metode ispitivanja. Specifičnost se može odrediti kao sposobnost metoda detekcije samo određeni uzorak (analita) tvar i ne otkriti bilo druge tvari, čak i vrlo sličnu strukturu s njim. Drugim riječima, specifičnost - sposobnost metode da bi minimalni broj lažno pozitivnih nalaza. Specifičnost imuno prvenstveno određuje specifičnost primarnih protutijela. To bi trebao biti posebno visoka kad hormoni ispitivanja s istim ili sličnim antigenske determinante. Na primjer, hormoni adenogipofizarnye FSH, LH, TSH i hCG se sastoji od dva polipeptidna lanca - calamus, gdje je lanac su identični. Ako se analiza bilo kojeg od tih hormona, kao što su FSH, kao primarni protutijela koristi nizkospetsifichnuyu poliklonskim antiseruma, većina antitijela veže za lance sve četiri hormona, tako da je mjerni rezultat lažno pozitivan. Ovaj fenomen se naziva unakrsna reaktivnost. Cross-reaktivnost opaža kada mjerenje prolaktina, koja pripada istoj obitelji s hormonom rasta i placentalni laktogeni (svi ovi hormoni su vrlo slične N-terminalna sekvenca aminokiselina).

Specifičnost poliklonalnih primarnih protutijela može se povećati na stupcu imunoadsorpcije antiseruma s odgovarajućim antigena. Ovaj pristup je široko korišten prije pojave hibridom tehnologije. U ovom trenutku, kao primarnog protutijela gotovo uvijek koristi visoko specifična monoklonska antitijela koja se vežu na antigene determinante jedinstvenih za taj hormon.

Specifičnost je imunokemijskom analize ne ovisi samo o svojstvima primarnog antitijela, ali i iz mnogih drugih, ponekad i nepredvidljivih faktora. Posebno, specifičnost može se smanjiti zbog unakrsne reakcije s primarnim antitijelima, nekog nepoznatog komponente u ispitnom uzorku seruma ili plazme. Postoje slučajevi kada su neki od konformacije promjena proteina sirutke, zbog čega on postaje antigenske sličnost s analiziranom hormoni. Konačno, serumske komponente mogu se uvesti u aktivnih mjesta primarnog antitijela i smanjiti njihovu specifičnost vezanja na antigen. Imuno tehnologije, postoji nekoliko načina da se spriječi unakrsne reakcije, međutim, nemoguće predvidjeti sve iznenađenja.

Video: live zdrava! Liječenje muške neplodnosti

Imunokemijske većina sustava za ispitivanje dizajnirani za mjerenje razine hormona u pojedinim tjelesnim tekućinama (serum, plazma, urin, slina). Prema tome, specifičnost testa sustava uspostavljen ovim biološkim tekućinama. Ako takvi sustavi za ispitivanje upotrebljava se za in vitro analize hormona, kao što je nakon inkubacije endokrinih stanica u Krebsovom puferu otopina ili Ringerova ili u bilo kojem mediju kulture, potrebno je provjeriti njihovu specifičnost osobito takvih „abnormalnih” uvjetima.

osjetljivost

Osjetljivost imunokemijskom testa može se definirati kao minimalne koncentracije tvari koje se mogu mjeriti pomoću ove metode. Procijeniti osjetljivost upotrebom standardnog uzorka s poznatom koncentracijom hormona ili drugi antigen. Ovaj uzorak je pripremljen serijskim razrijeđenjima uzorka sa smanjenjem koncentracije hormona. Dakle, osjetljivost ispitnog sustava izravno je proporcionalna stupnju razrjeđenja standardnog uzorka, s kojim je moguće dobiti točan rezultat mjerenja. Osjetljivost testa imunokemijskom sustava ovisi prvenstveno o afinitetu primarnih antitijela, koje se koriste u njemu. Nadalje, osjetljivost ovisi o vrsti imunotesta, na kojoj je test sustav dizajniran. Općenito, osjetljivi testni sustavi temeljeni na RIA je veći od immunohemilyuminestsentnogo analize test sustava temelji i ELISA.

Video: Što je hrana? 5 Kriteriji. Sirova hrana, fruktoedenie

Procijeniti osjetljivost upotrebom standardnog uzorka s poznatom koncentracijom hormona ili koji drugi antigen. Ovaj uzorak je pripremljen serijskim razrijeđenjima uzorka sa smanjenjem koncentracije hormona. Dakle, osjetljivost ispitnog sustava izravno je proporcionalna stupnju razrjeđenja standardnog uzorka, s kojim je moguće dobiti točne rezultat mjerenja.

Osjetljivost imunokemijskom ispitnog sustava treba biti takva da se može koristiti za mjerenje razina hormona se nalazi ne samo u normalnom rasponu koncentracija, ali i ispod ove granice. Stoga testni sustavi dizajneri nastoje postići osjetljivost između 3. do 5. percentila i standarda u rasponu od dva do tri standardne devijacije od donje granice normale. Na primjer, u rasponu od normalnih koncentracija LH u žena 1,1-77 IU / L (2.3 162 pmol / L). Prema tome, osjetljivost testa sustava za mjerenje LH trebala bi biti oko 0.4 IU / L (0.84 pmol / L). Ova visoka osjetljivost je posebno važno kada je potrebno izmjeriti niske koncentracije LH, posebno za diferencijalnu dijagnozu primarne amenoreje. U ovom slučaju, razine LH ispod 10 IU / L označavaju srednju (hipogonadotrofnog hipogonadizma), a više razine - po primarni hipogonadizam. Imunokemijske test sustav mora imati visoku osjetljivost i u onim slučajevima u kojima želite uhvatiti i najmanju promjenu u koncentraciji hormona. Najčešće se ovaj problem javlja u planiranju i procjeni učinkovitosti nadomjesne hormonske terapije. Na primjer, u liječenju hipotireoze doze levotiroksina odabran mjerenja TSH. Inače TTG razina varira između 0,4 i 4 mIU / L (2,9-29 pmol / L). dok moderni ispitni sustavi za mjerenje TSH imaju osjetljivost bolji od 0,01 mU / L (0,073 pmol / l). Ponovljeni vrlo osjetljive mjerenja TSH dopustiti endokrinolog vrlo precizno prilagoditi dozu levotiroksina.

Osjetljivost testa sustava ovisi prvenstveno o afinitetu primarnih antitijela, koje se koriste u njemu. Nadalje, osjetljivost ovisi o vrsti imunotesta, na koji je razvijen sustav ispitivanje (RIA analiza immunohemilyuminestsentny, ELISA). Osjetljivost analize RIA i immunohemilyuminestsentnogo općenito višoj od osjetljivosti ELISA, kao što je u prve dvije metode imunokemijskih reakcije odvijaju se u tekućoj fazi, pri čemu su antigenske determinante hormona postaju dostupni primarnih protutijela. Međutim, za istraživačke svrhe, a izrađeni su vrlo osjetljivi testni sustav koji se temelji na ELISA.

točnost

Ovaj stupanj bliskosti mjernog rezultata koncentracije hormona na njegovu pravu vrijednost. Točnost ovisi o osjetljivosti i sustavne greške u postupku: to je veća osjetljivost i manja pogreška, to je veća točnost. Točnost imunokemijskih sustava za ispitivanje, procijenjena je mjerenjem koncentracije hormona u standardnim uzorcima.

obnovljivost

Ovaj postupak test sposobnosti imunokemijskom daje slične rezultate moguće ponovljenih mjerenja koncentracije hormona u istom uzorku pod različitim uvjetima (u različita vremena, u različitim laboratorijima). Za procjenu obnovljivosti bio korišten kao standardnih uzoraka dobivenih od bolesnika i uzoraka. Da bi se postigla visoka ponovljivost, laboratorij mora biti tečan u radu s ovom metodom test sustava i mjerenja pod standardnim uvjetima (na istoj temperaturi, isti trajanje zadržavanja reakcija).

Video: Svijest Tehnologija - Rad s automatskim biokemijski analizator ChemWell-T

Specifičnost, osjetljivost i ponovljivost obvezna su navedene u uputama i tehničkim listovima za sve komercijalno dostupnih Imunokemijske sustava za ispitivanje i imunokemijskom autoanalizatoru. Ipak, svaki laboratorij treba samostalno procijeniti sve te postavke, posebno ponovljivosti, u stvarnim radnim uvjetima.