VWF antigen: određivanje metoda

Na površinu plastičnih jažica ploče sorbira antitijela na von Willebrandov faktor. U prvoj fazi istraživanja u bunaru mikropločicu dodaju uzorke BTP. VWF molekule učvršćene na odgovarajućim protutijelima i kada ostaje vezan ispere. U drugom koraku u analizi jamici dobivanje poliklonskih antitijela. Na sljedećoj fazi istrage u otvor od kromogena otopine. Ova tvar je slikano nakon enzimima. Intenzitet bojenja ovisi o sadržaju Willebrandov faktor.

Imunološki metoda za određivanje von Willebrandov faktor može biti implementiran pomoću raketa elektroforezu.

Koeficijent varijacije ELISA za određivanje vWF: Ag je manje od 10%.

Video: Određivanje krvne grupe i Rh faktora

Reagensi i oprema

• Pufer za ispiranje koncentrat (pH 7,3).
• pufer za inkubaciju (PBS- pH 7,3).
• Liofilizirani standardima.
• Uzorci liofilizirane kontrolu niskih i visokih razina.
• Konjugat poliklonskih protutijela.
• Otopina supstrata.
• Stop rješenje.

Video: Krv (antigena krvnih grupa, Rh) [to je jednostavan]

Distributer dijagnostički kit reagensa - CJSC "BIOHIMMAK".

Uzorci krvi za istraživanje

Za izvođenje faktor Test Willebrandov preko PPP-a.

tehnika izvedba

Izgradnja kalibracijske krivulje. Nadalje, potrebno je izgraditi kalibracijske krivulje korištenjem linearnog koordinatni sustav. Konstruirati pomoću kalibracijske krivulje Dobivena vrijednost apsorbancije razrjeđivanjem uzorka s poznatom koncentracijom von Willebrandov faktor. Na x osi nanosi na koncentracijama vWF: Ag u U / ml ili posto (1 U / ml) = 100%, a na y-os pokazuje apsorbanciju. U tim slučajevima u kojima postoje uzorci čija je vrijednost apsorpcije veća od vrijednosti najviše točke kalibracije, moraju biti dodatno razrijeđen s puferom za inkubaciju (1 + 1) i ponovno testirati. Tako dobivena koncentracija mjerenje mora biti pomnožen s faktorom razrjeđenja.

Evaluacija rezultata studija

Koncentracija vWF: Ag u zdrave osobe varira. Propisi ovise o verziji dijagnostički komplet, opremu, krv, reagense i mnogo više, tako da ne postoji općeprihvaćena normalne vrijednosti kad se mjeri taj pokazatelj. normalni raspon je obično naveden u uputama proizvođača reagensa za određivanje Willebrandov faktor, ali mnogi proizvođači preporučuju da svaki laboratorij uspostaviti vlastiti raspon normalnih vrijednosti. Važno je zapamtiti da se prosječne vrijednosti razine tog proteina sa I krvnoj grupi je oko 10% manja nego kod ostalih pacijenata koji uvijek treba razmotriti u dijagnostici hemoragične bolesti.

Uzroci pogrešaka

• Odsutnost ili neučinkovitost sustava unutarnje kontrole kvalitete. Trenutno dostupni uzorci referentnih materijala certifikat vrijednosti s Willebrandov faktor. S obzirom na prisutnost temeljno različitih metodoloških pristupa za određivanje proteina, morate pažljivo provjeriti verziju studije, za koje ispitni uzorak ima certifikat.
• Točna doza od citrata u ogradu venske krvi. Nedostatak natrijevog citrata zbog niskog hematokrita i hemolize dovesti do pogreške i ne ponovljive rezultate.
• Hemoliza.
• Povećava vWF promatrati u stresnim situacijama tijekom vježbanja, trudnoćom, krvarenje, hipertenzije, zaraznih bolesti, estrogenske terapije. Kod žena, u različite dane menstrualnog ciklusa može biti odstupanja u koncentraciji Willebrandov faktor. Standardizirati hormonski utjecaj na sadržaj multimernog proteina, neki stručnjaci preporučuju dijagnosticirati von Willebrandov bolesti u žena između 5. i 7. dan menstrualnog ciklusa.

Ostale analitičke tehnike

Nažalost, ne postoji niti jedan postupak koji se može uzeti u obzir sve od brojnih varijanti ovog proteina anomalija, međutim za dijagnosticiranje vWD je razvio niz laboratorijskih testova. Osnovne metode istraživanja korištene za identifikaciju nedostataka ili kvalitativni abnormalnosti Willebrandov faktor, na temelju uporabe enzima tehnikama imunološke. Nadalje, za dijagnozu bolesti učinkovito istraživanje agregaciju trombocita funkcije normalne tretirane s ispitivanom ristocetina dodatkom PRP. U svrhu kvalitativnog diferencijacije poremećaja molekule ovog proteina dodatno zaposlenog i drugih metodičke pristupe.

Određivanje ristocetina-kofaktor aktivnost Willebrandov faktor

Formalinu tretira trombociti gube sposobnost obavljanja mnogih svojih funkcija, r. H. nastajanju i funkcioniranju jedinica kao odgovor na dodatak najpoznatije funkcije induktori agregacije, ali s dodatkom ristocetina u mješavini tih pločica i studija u plazmi su brzo slijepiti. U ovom test sustavu ozbiljnosti aglutinacije izravno ovisi o prisutnosti von Willebrandov faktor, no sa smanjenjem koncentracije ovog proteina ili njegova kvaliteta manje vrijednosti takvih aglutinacije slabo izražen ili odsutan zajedno. Postoje dvije opcije prinitsipialno sličnu metodologiju za određivanje ristocetina-kofaktor aktivnost Willebrandov faktor. Porijeklo - kvantitativni, zahtijeva za njegovu provedbu agregometru drugi - semikvantitativna, što uključuje vizualnu procjenu vrijeme pojave sklon sljepljivanju u mješavini razrjeđenjima ispitivanog plazme i ristocetina pločice formalinom tretirati. Obje metode imaju koeficijent varijacije manje od 10%.

Dijagnostičke metode potrebno je razlikovati različite verzije Willebrandov bolesti

Određivanje aktivnosti kolagenom vezanja na von Willebrandov faktor. Adhezija trombocita na subendotelnu kolagenih vlakana ostvaruje se receptora trombocita GP-lb / V / IX. Ta interakcija potrebna vWF kao kofaktor, tako da se anomalija multimerni protein ili njena nedovoljna sposobnost poremećen trombocita vezanjem na receptore kolagen. Za određivanje aktivnosti kolagenom vezanja zahtijeva skup reagensa i opreme za izvođenje ELISA. Njegov koeficijent varijacije ne prelazi 15%.

Određivanje multimcmi Willebrandov faktor. Moderna diferencijalna dijagnoza većini varijanti tipa 2 vWD također se temelji na proučavanju multimcmi Willebrandov faktor. Za procjenu sposobnosti ovog proteina za dobivanje multimera sve koristi imunološki elektroforezu. Postupak za utvrđivanje multimemi dosta komplicirano, zahtijeva opremu za imunološki elektroforezu, pogodan za primjenu u specijaliziranim laboratorijima rutinski obavljati imunološki elektroforeze, dijagnostički kompleti da ga provede tamo. Informacije o osjetljivosti i specifičnosti ove dijagnostičke metode u suvremenoj literaturi nije zastupljen, ali postoje izvješća o dosad nepoznatim verzije multimernog proteina, koje neki stručnjaci smatrao dijagnostičkih artefakata.

Određivanje nakupljanja trombocita s ristocetina (R1PA). Povreda agregacije trombocita inducirane ristocetina česta bolest laboratorijska Willebrandov manifestacija. Ovo rješenje za identificiranje visoko specifičnih podtipa 2B von Willebrandov bolesti u kojima je abnormalno visoku agregacije kao odgovor na dodatak niskih koncentracija ristocetina. U drugim anomalijama, ova metoda je samo u drugom planu, jer je uobičajena doza može se podijeliti na raznim izvedbama ovog patologije. Za provedbu ove tehnike zahtijeva agregometru i ristocetina. Obnovljivost studije agregacije s ristocetina velikoj mjeri ovisi o agregometru model, iskustva i obuke kadrova.

Video: Krv grupiranje po unakrsnoj vatri i Rh faktor