Metode laboratorijske dijagnostike. imunološki postupci

Video: CMD - Centar za molekularnu dijagnostiku

Imunološki metode imaju važnu dijagnostičku i prognostičku vrijednost u mnogim reumatskim bolestima.

Studija nespecifično imunitet uključuje ispitivanjem broja leukocita i monocita u krvnom serumu, nadopuniti komponente procjenu mobilnosti fagocita i mikrobicidnu aktivnost mononuklearnih fagocitnih, proizvodnju proupalnih citokina (IL-ip, IL-6, TNF-alfa, i drugi.).

Razine komplementa porast zabilježen je u akutnoj upali, infektivnih procesa i do smanjenja - pod imunokompleksa bolesti. Na taj način, smanjiti koncentracije C2-Cs, i komplement komponenata u reakciji taloženje s antiserumom tipičnim za SLE, RA, ankilozantni spondilitis, vaskulitis, ulcerozni kolitis. To je zbog aktivacije komplementa sustava zbog stvaranja imunih kompleksa. Određivanje dijagnostički značajne komponente komplementa u sinovijalnoj tekućini (sadržaj smanjuje RA) u likvoru (sadržaj smanjuje s lupus tsereb-rovaskulite) u biopsija kože i bubrega.

Stanje stanični imunitet procjenjuje kvantitativnim pokazatelja (apsolutni i postotak limfocita T, T-limfociti aktivni, T-helper tipa I i T-limfocite citotoksični) i funkcionalnih testova.

Najčešće korišteni:
&Reakcijska diams- migracija leukocita inhibicija (RTML) u prisutnosti antigena i mitogene: RTML s fitohemaglutininom (PHA), konkanavalinom A (Con A), alergeni hemolitički Streptococcus, Staphylococcus. Reakcija se ovisno o svojstvu limfocita s senzibilizacije na antigena da se dobije stabilizaciju limfokini inhibicije migracije leykotsitov- jače funkcionalno djelovanje limfocita, manji brojki RTML;
&diams- limfocita blastne transformacije (BTR), koja je procijenjena korištenjem funkcionalnu aktivnost T-limfocita. U odgovoru na mitogene (PHA), Con A i antilymphocytic serumu i sur. Transformacije limfocita pojavljuje u lymphoblasts (veće puhanje stanice je formirana, je veća aktivnost T-limfocita).
Subpopulacije T-limfocita određuje s monoklonskim antitijelima.

Za procjenu funkcionalno stanje humoralnog imuniteta kvantitativno određivanje imunoglobulina u krvnoj plazmi. Imunoglobulina (Ig) - proteini posjeduju funkciju protutijela i podijeljena u pet glavnih klasa: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG u serumu u najvišoj koncentraciji (6,39-13,49 g / l), što iznosi 80% od aktivnosti protutijela. Razlikovati 4 podrazreda IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) i IgG4 (1-3%).

IgA glavni je imunoglobulin izlučuje se u slini, suzama, bronha i crijevni sekreta i mlijeku. Tajne IgA dimera je oblik koji sadrži J-lanca, drugi peptid nazvan sekretorna komponenta. Koncentracija IgA u standardu je 0,7-3,12 g / l.

IgM ima od 5 monomernih podjedinica povezanih disulfidnim mostovima i J-lanac, tvoreći pentamer. Koncentracija seruma IgM obično čini 0,86-3,52 g / l.

IgD je u tragovima u serumu, ali je osnovni tip imunoglobulina prisutan na membranama B-limfocitima. IgE igra važnu ulogu u reakcijama neposredne preosjetljivosti.

Da se odredi koncentracija glavnih klasa imunoglobulina (IgG, IgM, IgA) koristeći metodu radijalnog imunodifuzija ili nephelometric tehnike, IgE - vrlo osjetljivi radioimunološka ili imuno testom tehnike.

Određivanje koncentracije imunoglobulina se koriste za dijagnosticiranje primarnih ili sekundarnih imunodeficijencija (u tim slučajevima, smanjenje koncentracije glavnih klasa imunoglobulina), i monoklonsko immunoglobulinopaty (u kombinaciji s immunoelectrophoresis serumu i urinu).

Najčešći oblik imunodeficijencije je IgA immunodefi-op, čiji razvoj se ponekad promatra u reumatskim bolestima, a može se odvijati na pozadini određenih lijekova (D-penicilamin, sulfasalazin, kaptopril i drugi.). Povećanje koncentracije IgA često promatraju u seronegativnih spondiloartropatija, hemoragijski vaskulitis, Sjogrenov sindrom, psorijatični artropatija.

Često u upalnim reumatskim bolestima opaža razvoj poliklonalnih Hyper.
Reumatoidni faktor (RF) su autoantitijela na Fc fragmenta IgG, iako mogu biti povezane s IgM i IgA.

Možda blokirati reumatoidni faktor autologni IgG, što dovodi do povećanja posto skrivenim, RF kompleksu (s duljim trajanjem reumatoidnog artritisa s vistseritami).

Identificirati RF klase M primjenjuju se:
&diams- lateks aglutinacija inertna čestice lateksa obloženi humanog Ig. Najveća davanja razrjeđenju seruma aglutinacija titar smatra reakciju. Titar 1:20 ili više smatra pozitivnim;
&Reakcijska diams- Vaaler Rosa sa crvenim krvnim stanicama ovce obloženim zečji anti-ovčjih crvenih krvnih stanica.

Najveći razrjeđivanja seruma za dobivanje aglutinacija dijagnostički značajne, ako ne i manje od 1:32.
Lupus (LE) stanicama. Prisutnost LE-stanica s obzirom na prisutnost u serumu IgG klase antitijela na DNA kompleksa, histon koji reagira s jezgrom oslobađaju iz različitih stanica kao rezultat uništavanje takvih stanica. LE-stanice se nalaze u 60-70% pacijenata sa SLE. Oni su zreli neutrofili, fagocitozu nuklearna tvar od uništenih stanica. U citoplazmi neutrofila naći veliku homogenu uključivanje (hematoksilinom tjelešaca).

U slučaju nepotpunog fagocitoze pomoću neutrofila nakupljenih oko tele hematoksilin-oblikovanog priključka (Rozeta formiranje fenomen). Rezultat detektirati bar LE-5 stanica po 1000 bijelih krvnih stanica se smatra pozitivnim. Iznos jedinične LE stanice mogu se naći u 10% RA pacijenata, kronični aktivni hepatitis, alergije na lijekove, periarteritis nodoza, sistemske sklerodermije, dermatomiozitisa, miješane bolesti vezivnog tkiva.

Antinuklearna antitijela (Aha) najčešće definirano reumatskih bolesti te se javljaju u više od 90% pacijenata SZST. Oni su obitelj autoantitijela u interakciji s ribonukleinskih kiselina i proteina, jezgre, citoplazme antigena. Aha određuje indirektne imunofluorescencije, dvostruka imunodifuzija i kontrelektroforeza, ELISA i imunoblot.

Kada se koristi neizravna metoda imunofluorescencije u praksi, postoji šest vrsta bojanje ili svjetlucanja, jezgre koji su važni za dijagnozu sistemskih bolesti vezivnog tkiva:
&diams- homogena bojanje, zbog prisutnosti antitijela na dvolančanu DNK i histona, najkarakterističniji SLE i lupusa doze;
&diams- perifernu bojanje uzrokovane cirkulirajućih antitijela na staničnu membranu (specifično za SLE);
&diams- granulirani bojenje se najčešće javlja, ukazuje na prisutnost različitih AHA, pa ima najniži specifičnost (navedeno u SLE, RA sa vaskularnim manifestacija, miješane bolesti vezivnog tkiva);
&diams- nucleolar (nucleolar) luminiscencija, zbog komponente antitijela jezgricom pojavljuje u SSC, bolesti Shegrena- ANF povremeno se u endokrine bolesti (poliendokrinopatiya, dijabetesa tipa I mellitus, tiroiditis, tirotoksikoza), kožne bolesti (psorijazu, pemfigus), kao pozadina trudnoće nakon transplantacije organa i tkiva (na razvoj reakcije „graft versus host”), u pacijenata na dijalizi,
&diams- centromerni luminiscencija je promatrana u izgledu protutijela na centromera kromosoma (karakterističan kronični MIC);
&diams- citoplazmatskog svjetlo pokazuje prisustvo protutijela protiv tRNA sintetaza, posebno Jo-1 (obično u dermatoloških i polimiozitis).

Metode i radioaktivnog imunološkog vezanje, radijalno imunodifuzija, imunoprecipitacijom otkriva Ha na specifične nuklearne antigene.

Antitijela deoksiribonukleinske kiseline (DNA). Antitijela na nativni (dvostruke uzvojnice DNA), naročito one koje su detektirane radioimunoispitivanjem testova (Pharr metoda), relativno specifičan za SLE. Njihova definicija je bitno za procjenu aktivnosti bolesti, predviđanje razvoja egzacerbacije i učinkovitost terapije. Antitijela denaturiranog (pojedinačnog) DNA manje specifične za SLE, a često i detektirana u druge reumatske bolesti.

Protutijela na histona. Histoni - osnovna komponenta, koji se sastoji od tri podjedinice: dva dimera H2A-H2B s obje strane NS-H4 tetramer i povezane s trećim podjedinica sastoji od dva zavoja u molekuli DNA.

Antitijela na histona H2A-H2B nalaze se u gotovo svih bolesnika s lupus lijek sindrom (inducirana novokainamidom), u bolesnika koji su primali procainamid, ali nemaju simptome lupusa, kao i kod 20% bolesnika sa SLE.

Protutijela na ribonukleoproteinskog (RNP). Antitijela u ribonukleoproteinskog sadrže anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-Ro / SS-A, anti-La / SS-B, nalaze u SLE ukupno više od antitijela na dvolančanu DNA. koncentracija u krvi ovih antitijela je vrlo visoka. Pronađeno u miješanom bolesti vezivnog tkiva, barem - u bolesnika sa SLE, koji je vodeći na kliničke manifestacije kožnih lezija, subakutni SSD i drugih autoimunih reumatskih bolesti.

Antitijela na Sm (Smith) -antigenu. Antitijela na Sm-antigen se nalazi samo u SLE. Upotrebom metode imunofluorescencija su identificirani u 30% slučajeva, a 20% - u skladu s postupkom iz hemaglutinacijskim. Antitijela na Sm-antigen nije detektiran u druge reumatske bolesti, te se smatraju kao markere SLE antitijela i njihova detekcija je jedan od kriterija za dijagnostiku bolesti. U prisutnosti Sm-protutijela je opažena na malignu bolest, središnjeg živčanog sustava, psihoze lupus i zaštitom bubrežne funkcije. Međutim, razina antitijela na SM-antigen nije u korelaciji s aktivnostima i kliničkih podtipova SLE.

Antitijela Ro (Robert) / SS-A su usmjerena protiv nuklearnih ribonukloproteine, koji su povezani s IL-Y5 citoplazmatske RNA transkribira, RNA polimerazom III. Ovisno o osjetljivosti metode se koriste za proučavanje antitijela Ro / SS-A nalaze se u 60-78% bolesnika s Sjogrenov sindrom, kod 96% pacijenata sa Sjogrenovim bolesti i 35-57% bolesnika sa SLE.

U SLE proizvodnja antitijela podataka povezanih s određeni skup laboratorijskih i kliničkih manifestacija bolesti: osjetljivost, Sjogrenov sindrom, oštećenja pluća, limfopeniju, i trombocitopenija hiperprodukcija RF. Povećanje koncentracije antitijela za Ro / SS-A u kombinaciji s hiper IgM RF često je zabilježena u ANF-negativne podtipa bolesti (u 2-5% bolesnika sa SLE) - tzv subakutni kožnog lupusa.

Antitijela La (Lane) / SS-B usmjereno na protein koji je povezan s transkriptima RNA polimeraze III. Antitijela La / SS-B u većini slučajeva se javljaju u svezi s antitijelima za Ro / SS-A, dok je potonji se može pojaviti u izolaciji. Antitijela La / SS-B nalaze se u bolesti i Sjogrenov sindrom, u kombinaciji s RA i SLE (sistemski ali ne skleroderma) i primarne bilijarne ciroze. U SLE antitijela za SS-B / La-antigen vjerojatno pojaviti ranije tijekom razvoja bolesti, koja se razvija u starosti, te je povezana s manjim učestalost razvoja nefritis.

SCL-70 protutijela obično su otkrivene u obliku difuzne sistemske skleroze. U ovom prisutnosti bolesti Scl-70 protutijela, u kombinaciji s genima dopremni HLA-DR3 / DRw52 17-struko povećan rizik za razvoj plućnu fibrozu. Detekcija Scl-70 protutijela u bolesnika s izoliranim Raynaud-ovog fenomena pokazuje visoku vjerojatnost razvoja sistemske sklerodermije.

Antitsentromernye antitijela (ASA) nađeno 20% pacijenata sa sistemskom sklerozom (većina njih postoje dokazi CREST-sindrom), barem - primarne bilijarne ciroze (polovica ovih pacijenata, postoje naznake sklerodermije), a vrlo rijetko - u kronični aktivni hepatitis i primarna plućne hipertenzije. Antitijela protiv centromere smatra kao štetni prognostičkog pokazatelja razvoja sistemske skleroze u bolesnika s Raynaud-ov sindrom.

Antitijela aminoatsilsintetaze tRNA (antisintetaznye antitijela) je određena u prisustvu bolesnika s polimiozitis intersticijske plućne bolesti. Općenito sintetaze antitijela su otkrivena u 40% pacijenata sa polimiozitis, 54% pacijenata s idiopatskom dermatomiozitisa u slučaju oblika ovih bolesti, kao i samo 6% bolesnika s polimiozitis, jedan od ostalih pojava tijekom tumora DBST- miozitis ta antitijela nisu otkriveni. Proizvodi antisintetaznyh antitijela povezana s razvojem tzv „antisintetaznogo sindrom”.

Antifilaggrinovye antitijela (APL) su obitelj koja uključuje antikeratinovye antitijela antiperinuklearny antitijela faktora Sa antigena i antitijela na nedavno opisao cikličkog peptida koji sadrži citrulin. Prema modernim konceptima, glavna antigenska determinanta prepoznat ovih antitijela je citrulinirane peptidi, koji, osobito prisutni u sinoviju bolesnika s reumatoidnim artritisom (RA). AFA su visoko specifična za RA. Najkorišteniji su AFA u dijagnostici ranog RA. Nekoliko istraživanja su pokazala agresivniji tijek RA u prisutnosti ovih antitijela u bolesnika.

Antitijela fosfolipida (APL) - heterogena skupina autoantitijela koja reagiraju s negativno nabijene (fosfatidilserina, fosfatidilinozitol, kardiolipin) i neutralni (fosfatidiletanolamin, fosfatidilkolin) fosfolipidi. To su lupus antikoagulans, kardiolipinskim antitijela i čimbenike koji određuju razvoj lažno pozitivnih Wasserman.

Lupus antikoagulans (LA) - imunoglobulini klase IgG i / ili IgM, inhibiraju in vitro jedan ili više fosfolipidzavisimyh reakcija koagulacije, BA tretira kao reprezentativni obitelji antitijela na fosfolipide, njihova sinteza je povezana s razvojem arterijske ili venske tromboze.

Antikardiolipinska antitijela (ACL). Za određivanje CLA koristi imunosnim metoda. CLA proizvoda (osobito kada visoke titre IgG ACL), kao i formiranje BA, povezana je s razvojem antifosfolipidni sindrom.

Lažno pozitivnih reakcija je brzo Wassermann serološki dijagnoza sifilisa postupkom na temelju standardne Suspenzija flokulacije fosfolipida (kardiolipina) serumu pacijenta koji sadrži anti-antitijelo (treponemal reagin). Za točniju dijagnozu sifilisa pomoću postupka imunofluorescencija treponemal antigen.

U 15-20% bolesnika s SLE otkrije lažno pozitivnih Wassermann reakciju, i 30% zdravih osoba s lažnim pozitivnim Wassermann reakcije u kasnijem razvoju SLE. Vrlo često lažno pozitivnih Wasserman i kod pacijenata s antifosfolipidnim sindromom.

Antineutrofilna tsitoplazmatineskie antitijela (ANCA). ANCA su obitelj autoantitijela usmjerenih protiv određenih antigena prisutnih u citoplazmi neutrofila. Postoje dvije vrste ANCA koji određuju metodom indirektne imunofluorescencije fiksnim neutrofila apsolutne donatore alkohola. Antitijela uzrokuje difuzno proteinazu III (klasični) i citoplazmatski sjaj označena kao K-ANCA ili p-ANCA. Antitijela mijeloperoksidaze, elastaza i laktoferina karakterizira tip emisija perinuclear i označen kao perinuclear ili p-ANCA. ANCA često otkrivena u sistemski vaskulitis.

Streptokokne infekcije antistreptokokne uzrokuje porast koncentracije antitijela. Određivanje antistreptokokne antitijela se koriste za dijagnosticiranje akutnu reumatsku groznicu (akutna reumatska groznica) i akutni glomerulonefritis.

Najšire određivanje antitijela streptolizin O (ASL-O), streptokinaza (ACK) i streptodezoksiribonukleaze (anti-B) Dnaze. Povećanje titre za SLA-O se nalazi u više od 2/3 bolesnika s akutnim reumatske groznice, a samo polovica bolesnika s akutnim glomerulonefritisa. Maksimalne dosezanje antistreptokokne antitijela identificiranih tijekom razvoja artritisa, a za vrijeme razvoja i karditis koreja titre ovih antitijela su značajno smanjeni, što smanjuje dijagnostičku vrijednost ovog testa.

Važno za dijagnozu za detekciju reakcije antitijela nakon infekcije: Wassermann reakcije vezanja komplementa reakcije tuberkulozom, pseudotuberculosis, Yersinia, šigeloze i drugi antigeni, HBs-antigeni, gonokoknog (Bordet-Gengou reakcija) i bruceloze (reakcijski Wright-Heddlsona) antigena titar anti-Chlamydia antitijela.

Cryoglobulins - skupina serumskih proteina sa nenormalnim sposobnost da reverzibilno taloženja ili formiranje gela na niskoj temperaturi. Cryoglobulins mogu se otkriti u raznim bolestima unutarnjih organa, uključujući i vrlo često u sustavne reumatskih bolesti.

Ovisno o sastavu cryoglobulins je podijeljena u tri glavne vrste. Tip I se sastoji od monoklonalnih imunoglobulina IgA ili IgM, barem - monoklonskih laki lanci (Bence Jones proteina). Tip II (promatrana u tzv mješovitog krioglobulinemija) koji se sastoji od monoklonskog imunoglobulina (obično IgM, rijetko - IgA ili IgG), koji imaju aktivnost protiv protuglobulinski poliklonskog IgG. Tip III (promatrana u tzv mješovitog krioglobulinemija) sastoji od jednog ili više slojeva poliklonalnim imunoglobulina. Najčešći oblik krioglobulinemija u reumatskim bolestima je tip III nalazi u SLE, RA, sistemska skleroza, Sjogrenov sindrom.

Cirkulirajući kompleksi (imuni CIC). Rastućim koncentracijama odražava CEC upalne i imunološke aktivnosti patološkog procesa u SLE, RA, spondiloartropatije seronegativnih.

VI Mazur

Dijelite na društvenim mrežama:

Povezan