Razvoj i korištenje metoda za određivanje cirkulirajućih serotip genotipa hepatitis C virusom.

Virus hepatitisa C (TOS), odnosi se na vrlo izraženu vozbuditelyams raznolikost populacije. Utvrđeno je da bolesnici s kroničnim HS povezane s različitim genotipamivirusa, različito reagiraju na virus interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS važan u epidemiološkim studijama, jer omogućuje prijenos dobro dokumentirani patogena.

Svrha ove studije - procijeniti vozmozhnostimetoda serotipizacije za određivanje genotipova HS. Dlyaserotipirovaniya preuzet je iz originalnog postupka, opisannyygruppoy istraživača iz Velike Britanije pod P.Simmonds navođenje (1993,1995). 12 i kratki peptidi (18-19 aminokiselina), koji predstavljaju epitopa proteina NS4 6 genotipovi farmi su poluchenymetodom čvrsta faza sinteze, pročišćavanja i kromatografijom vysokoeffektivnoyzhidkostnoy koristi kao temelj za imunotest s immunosorbentadlya seruma soderzhaschimiantitela na NS4 protein (anti-NS4) , Prisutnost anti-NS4 podtverzhdalosv ELISA smjesom peptida serotipizacije ili imunoblota (LiaTek HCV, Organon Teknika- Wellcozyme HCV Western blot, Murex).

Specifičnost određivanje genotipa teškog razarabotannymvariantom serotipiziranje proučavali usporedbom rezultata „slijepi” uzorku od 154 anti-sera NS4-pozitivnyhobraztsov s poznatih genotipova (osim 1 uzorka) je definiran pomoću postupka koji je opisan RFLP P.Pohjanpeltoet al. (1996) na Odjelu za virologiju Sveučilišta u Helsinkiju.

Za proučavanje širenje variantovvirusa GS u nekim dijelovima Rusije (St. Petersburg, Nižnji Novgorod, Ufa, Belgorod) i susjednih zemalja (Bjelorusija, Kazahstan, Gruzija) po serotipa su testirani protiv NS4-pozitivnyesyvorotki dobila od 474 ljudi, uključujući 157 davatelja krvi 237 pacijenata s hepatitisom C, a 80 osoba u riziku (vnutrivennyenarkomany, pacijentima s karcinomom, pacijenti hronicheskogogemodializa centara, bolnicama i drugim tuberkuloze.).

Rezultati „slijepi” za ispitivanje 154 syvorotoks poznatih genotipova virusa hepatitisa C do RFLP prikazana tablica №1. Općenito serotipirovano 148 uzoraka (96.1%). Polnoesovpadenie sumpor i genotipovi promatrana u 130 u 148 seruma (87,8%). Pojedinačnih genotipova brojka je razlichnym.Naibolshaya frekvencija odgovarajućih rezultata opaženi HCV-1 - (92,5%), s indeksom od 87,1% raspršenja za seruma subtipa1v do 100% za seruma s miješanim podtipova 1a + 1v- za HCV 3- 94,3% (sve serum obrađen podtip 3a). Najmanje rezultati protsentsovpadeniya opažena kad se ispituju na serume RFLP pripada HCV-genotipa 2 (80%). Kada otkrije 5 serotipirovaniibylo serum koji bi se mogli pripisati genotipuHCV-4. Međutim, kada se uspoređuju rezultate s RFLP podataka sovpadenieotmecheno samo 2 uzorka (40%).

Rezultati za otkrivanje visoka korelacija genotipovvirusa GS dobio dvije potpuno različite metode za proučavanje pozvolilaispolzovat serotip kruži GS variantovvirusa u odvojenim teritorijima. Rezultati ovog dijela issledovaniysummirovany u tablici №2. Općenito, svi proučavali territoriyahvyyavlena Circulation 3 genotipova HS u jednom sluchayahv četiri regije definirano HCV-4 genotip. Najčešće opredelyalsyagenotip HCV-1 (od 47,1% u serumima iz Gruzije do 74,4% - od Bjelorusija) .Vtoroe mjesto rang na brzinu detekcije svih teritorija okupirana prakticheskina HCV-genotipa 3 (15,5% u serumu od Belorussiido 34,0% - od Nižnji Novgorod). Manje proučavali syvorotkisoderzhali tip-specifičnog anti-HCV NS4-2. Maksimalna chastotavyyavleniya ovaj genotip je instaliran u serumu Bjelorusije (12,7%), Kazahstan (13,7%), a najmanje - u serumima iz St. Petersburga (3,8%). U 35 seruma iz svih krajeva studirao, s serotipizacija utvrdio je prisutnost anti-NS4 različitih genotipova (genotipova miješane). Najveći udio serumu uzoraka izrađenih smeshannymigenotipami u kojima oba opredelyalisHCV-1 i HCV-3 (26 35 - 74,3%), odnosno najčešće vstrechayuschiesyagenotipy. Druge varijante kombinacije ispunjeni znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11,4%). HCV-1 + HCV-4 u kombinaciji otkriva dvije serume Georgia (5,7%).

Materijali ovog istraživanja svidetelstvuyuto da primjena sintetskih peptida, sootvetstvuyuschihantigennym odrednice nekonstruktivne proteina NS4 u kachestveosnovnogo komponente imunoenzimnom ELISA omogućava uspeshnoopredelyat genotipova virusa u serumu oboljelih farma etimvozbuditelem ljudi i prati kretanje genovariantovvozbuditelya regije.

Za određivanje genotipa teške ispolzovanmetod PCR-RFLP tipa s specifične restrikcijske fermentamiBst U1 i BST N1 i naknadne analize restrikcijskih proizvoda uz pomoć vodoravnog elektroforezom u 3% -tnom agaroznom gelu (ThiersV. Et al., 1997). Ovaj postupak je testiran serumu bolesnika sa kroničnim krovi15 GS primaju interferon. RNKvirusa GS detektiran u uzorcima od 14, dok je u slučaju 6 (42,9%) montiran subgenotip 3a, 3 (21.4%) - 1 (2 gentip subgenotip1v 1 - subgenotip 1a). RNA virus GS, izolirani od 4 do obraztsovotnosilas rijetko uočljivih genotipovi patogena - 4/5. Poslednienahodki zahtijevaju daljnju kontrolu.

Tablica 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA S METODAMI RFLP i SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - ne tipipovalos ** - abs.chislo / postotak;

Tablica 2. CHASTOTA OTKRIVANJE PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA metodama SEPOTIPIPOVANIYA HA OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii I SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok sa genotipom dannym /% (100 nA s syvopotok ukazannoy teppitopii)

reference:

1. 1.Pohjanpelto P., Lappalainen M., A. et Widell al.// Clin.Diagn.Virol.-1996. -Vol.7. -P. 7-16
2. 2.Simmonds P., Holmes E.C Cha T.A. i al.// J.Gen.Virol.-1993-P-Vol.74.. 2391 -2399