Ctarenie u staničnim kulturama

Video: Jeunesse Global FINITI ™ starenjem stanica završava ovdje

sadržaj

Video: jeunesse global finiti ™ starenjem stanica završava ovdje
Kriteriji i razlozi smrti staničnim kulturama

Uporaba staničnih kultura u gerontologiju nudi jedinstvenu priliku za proučavanje mehanizama starenja i pronaći utjecaje koje utječu na taj proces.

Konkretno, metoda stanične kulture, omogućuje da se riješi sljedeće važne zadatke.

1. Usporedba kulture stanica izvedene od donatora različite dobi, moguće je razlikovati dobne promjene konstitutivnih induciranog. Na primjer, utvrđeno je da je aktivnost mitoze humanih kultura fibroblasta koji su pod istim uvjetima, opada s povećanjem starosti donatora stanica (Schneider, Mitsuija, 1976- Schneider, 1979).

Prema tome promatrati u starih tkivima organizama smanjenje mitotski aktivnosti (Gelfant Smith, 1972- Cameron, Thrasher, 1976) vezan za konstitutivnih promjena stanica samih.

S druge strane, povećanje dobne u indukcijski period tirozin jetra pod utjecajem hidrokortizon (Adelman, 1972) treba uzeti u obzir izazvana zbog različitih dobnih skupina u kulturi hepatocita štakora je opažene razlike u indukciji enzima (Britton et al., 1976). Dakle, aplikacija omogućuje stanične kulture kako bi se utvrdilo prirodu starenja.

2. Postupak u kulturi stanica pruža jedinstvenu priliku za istraživanje i pažljivim proučavanjem konstitutivnog biokemijskih (Vilenchik i sur., 1979) i citologija (Schneider, 1979), dobne promjene. Ova metoda omogućuje vam izravno potvrditi teoriju starenja (Danner i sur., 1978).

3. Komparativna studija staničnih kultura dobivenih iz različitih životinja, što ga čini moguće identificirati karakteristike stanica od posebnog interesa za biologiju starenja. Na primjer, utvrđeno je da su životinje pozitivno korelira s prostate fibroblasta u kulturi sposobnost za popravak UV-inducirana oštećenja DNA (Hart, Setlow, 1974), te u negativnoj korelaciji s intenzitetom vezanje karcinogena na DNA fibroblasta tih životinja (Schwartz, Moore, 1977, 1979). Dakle, mehanizmi za zaštitu genom od oštećenja su za gerontologiju poseban interes.

4. Dugotrajna kultura (oko godinu dana), in vitro stanice mogu modelirati mnoge promjene koje nastaju tijekom starenja. Iako je pitanje adekvatnosti in vitro uvjetima uvjetima in vivo ostaje otvoreno pitanje, starenje kulturama stanica je posvećen povećanju broja eksperimentalnih, pregled (Hay, 1967- Beršad, Gelfand, 1970- Cristofalo, 1972- Hayfiick, 1977- Gavrilov, Gavrilova, 1978) i teorijski rad (Olovnikov, 1973. do Holliday, 1975- Hirsch, 1978- Gavrilov, Yaguzhinskii, 1978).

Kriteriji i razlozi smrti staničnim kulturama

Trenutno instalirani Limited očekivano trajanje života (RV) slijedeće stanične kulture normalnih humanih fibroblasta (Hayfiick, moorhead, 1961 Hayfiick, 1965- Harper, Grove, 1979), konji, nekoliko vrsta kangaroos (Stanley i ostali, 1975.), marsupials Potorous tridactylus (Cristofalo, 1972- Stanley i sur, 1975), kornjače (Goldstein, 1974), kanadska kuna (Hayfiick, 1975), piletina (Kaji, Matsuo, 1979) i miš (Hayflick, 1975, 1977). - epidermalnih keratinocita (Rheinwald, Green, 1977), stanica glija (Brunk`et al., 1973), a iz ljudske jetre (Kahn i sur., 1977a, 1977b) normalnih kondrocitima (Mayne et al., 1976) i Rous virus sarkoma transformiranih chick fibroblasti (Ponten, 1970- Leblond-LaRoucheu, Morais , 1976).

Međutim, kritička analiza literaturnih podataka (Gavrilov, Gavrilova, 1978), čini se da još uvijek nema općeprihvaćene kvantitativni kriteriji za stanične kulture smrti, i sami koncepti - „smrt” i „Očekivano trajanje života” kulture - vrlo uvjetno i subjektivne.

Većina istraživača se zove kultura mrtav ako u roku od proizvoljno zadano vrijeme (obično jedan do četiri tjedna) prestaje da poveća svoju snagu na željenu vrijednost, bez obzira na povoljne uvjete za rast (obično postaviti broj, 2-4 puta broj početne kulture) ,

Po ovoj definiciji, smrt stanica u kulturi nije potrebna, kao i bilo kulturi održive, ali se ne dijele po toj definiciji, može smatrati mrtvim. Štoviše, kultura mrtvih i dalje polagano rasti, iako imaju djelovanje i nisku diobeno sadrže samo 10-20% stanica sposobnih za sintezu DNA replikativni (Cristofalo, Sharf, 1973. do Milo, Hart, 1976).

Takve kulture se ponekad spontano oporaviti normalan rast, a zatim napraviti nekoliko populacijskih dioba prije sljedećeg „smrti» (Holliday, Tarrant, 1972). Misa stanična smrt na kraju kulture života, koja u prilogu veliku važnost ranih radova (Hayfiick, Moorhead, 1961 Hayfiick, 1965), bio je artefakt reseeding rad.

Činjenica da uzgojem stanice redovito presađuju, t, E. prilogu obradu podloge sloja stanica 0,1% -tne otopine tripsina (tripsinizacijom) i odvajanje stanica isključivanje jednog do formiranja od hidrodinamičkih efekte (suspendiranje).

U prvih umrijeti velikih stanica (Milo, 1973), u kojoj je većina starih i mrtvih kultura (Bowman et al., 1975- Mitsui, Schneider, 1976). Osim toga, u tim kulturama povećan broj stanica kontakata, koji ne može biti uništena tijekom presađivanja, bez oštećivanja stanica sami (Milo, 1973).

Dakle, u uvjetima sporog rasta kulture pri konstantnom uništavanju stanica u procesu presađivanje dojam potpune lize. U onim slučajevima kada su isključeni utjecaj reseeding operacija, bez povećanja stope stanične smrti od starosti kulture ne opaža.

Prema tome, ograničene gušterače staničnih kultura isključivo uzrokovalo smanjenje mitotski aktivnosti, a ne gubitak samih stanica. Osim toga, postoji razlog za sumnju da je smanjenje mitoze aktivnost je uzrok većine morfoloških i biokemijskih promjena koje su uočene u stanicama starih i mrtvih biljaka.

Na primjer, utvrđeno je da je opisano na kraju životnog kulture „degenerativni” stanice koje u prilogu veliku važnost u ranim studijama (Hayfiick, Moorhead, 1961 Hayfiick, 1965.), ne izazivaju, kao posljedica smrti kulture, t. E. Smanjite mitotičkih aktivnost. Utvrđeno je da su mnogi od takozvanih „degenerativnih promjena” može se dobiti u mladom kulturi, potisnut na duže stanične diobe.

Sve te „degenerativne promjene” nestati nakon nekoliko dioba, ako ponovno stvoriti uvjete za rast usjeva (Brunk i sur., 1973). Povećanje veličine stanica u starenja kulture i očito uzrokovane usporavanje i zaustavljanje stanične diobe. Doista, povećanje veličine je opažena samo u stanicama koje se ne sintetiziraju DNA (Bowman et al., 1975).

Navedene činjenice ukazuju na to da je problem starenja staničnu kulturu biti se svodi na proučavanje uzroka, mehanizama i posljedica promatranom smanjenja mitotski aktivnosti.

Ovaj proces ne mora nužno dovesti do oštećenja i starenje stanica i može biti posljedica njihove diferencijacije (Gavrilov, Gavrilova, 1978- Gavrilov, Yaguzhinskii, 1978), što je često popraćeno smanjenjem mitotski aktivnosti (The Truman, 1976). Dakle, pojam „smrti”, „smrt”, „starenje” i „očekivano trajanje života” u staničnim kulturama su vrlo uvjetno, kao i pojam „mladi” i „stare” kulture.

Njihova upotreba kompleta istraživača za proučavanje mehanizama bolesti i ozljeda, iako je samo postojanje tih ozljeda i poremećaja u kulturi stanica nije dokazano, a nije utvrđena njihova uloga u smanjenju mitoze aktivnosti.

Dakle, to je poželjno koristiti druge izraze koji bi usmjerio pažnju istraživača je o tome što se zapravo događa, to je. E. Na smanjenje mitoze aktivnosti. Takvi uvjeti su već uvedeni.

Umjesto toga, pojmovi „života”, „starenje”, „smrt” i „smrti” Predlaže se koristiti pojmove „replikativnoga životni vijek” kultura stanica „replikativnoga starenje”, „smrt replikativne” i „replikativnoga smrti” u kulturi stanica.

Koncept „mlade” i „stare” kulture i sada se koristi s pridjevom „replikativnoga”. Mladi (dijeljenjem) stanice nazivaju replikativnoga, i stari i mrtvi (bez pregrada) - postreplicative.

Za sažetosti, stari pojmovi ponekad stavljaju u navodnike, tako naglašavajući njihovu konvenciju (Norwood i sur., 1974- Gavrilov, Gavrilova, 1978). Značajno je da čak i sada biološka starost kulture određen je postotak stanica koje nisu u stanju sinteze DNA replikativni (Cristofalo, Sharf, 1973. do Bowman et al., 1975).

Trenutačno, teret osnovan sljedeće osnovne manifestaciju „starenja” staničnih kultura.

1. Smanjena udio stanica sposobnih za dijeljenje (Merz Ross, 1969- Cristofalo, Sharf, 1973).

2. Povećanje razdoblje diobenog ciklusa. Radioautographic detektira povećanje minimalnog perioda od generacije stanica u kulturi humanih fibroblasta od 16 do 21-22 sati (Macieira-Coelho et al., 1966). Filmski istraživanje pokazalo je porast od prosječnog vremena između oznaka s „starenja” ljudskih kultura fibroblasta od 16,8 do 32 sati (Absher i sur., 1974).

3. „starenje” stanične kulture poboljšani inhibicijski učinak gustoće populacije na brzinu rasta (Macieira-Coelho et al., 1966- Absher et al., 1974- Schneider, Mitsui, 1976), tako da je gustoća zasićenja na replikaciju starih kultura je približno 2 puta manji od "mladih" kultura (Schneider, Mitsui, 1976).

Dijelite na društvenim mrežama:

Povezan