Laboratorijske dijagnoza zaraznih bolesti

Uobičajene vrste ispitivanja uključuju mikroskopijom, ispitivanje kulture, imunološke testove (eseje aglutinacije kao što je lateks, imuno testom aglutinacije, western blot testovi, taloženja i testovi vezanja komplementa) i metode identifikacije i nukleinskih nisu nukleinske kiseline. Obično test kultura - je zlatni standard za identifikaciju mikroorganizama, ali rezultati možda neće biti dostupan za nekoliko dana ili tjedana. Osim toga, uzročnici mogu biti izolirane u kulturi, što ih čini korisnim alternativne testove. Kada patogena provodi test kulture, a utvrđuju se, laboratorij može procijeniti njegovu osjetljivost na antibiotike.

Neki testovi (npr Gram bojenje, uobičajeno aerobni kultura) može otkriti razne patogene. U isto vrijeme, neki patogeni ne mogu se identificirati u analizi. Dakle, liječnici bi trebali biti svjesni ograničenja svakog ispitivanja za određene mikroorganizme. U takvim slučajevima, liječnici bi trebali pitati za testove koji su specifični za osumnjičenog patogena (npr, posebne boje ili medij za kulturu) ili preporučiti određene laboratorijske testove za izabrati.

mikroskopija

Mikroskopija se može obaviti brzo, ali je točnost ovisi o iskustvu laboratorijske radnika i kvalitete opreme. Upute često ograničavaju korištenje liječnika mikroskopom za dijagnostičke svrhe je certificirani laboratorij.

Većina životinja obrađenih s bojama koje boje patogeni koji ih čini stand out od gužve, iako se može koristiti mokro preparati neoznačeni uzoraka za otkrivanje gljivica, parazita, informativan stanice iz rodnice, mobilni organizmi (npr Trichomonas) i sifilis (mikroskopija, tamno ). Detekcija gljivica može poboljšati korištenjem 10% kalij hidroksida da se otopi okolnog tkiva i ne-gljivične organizama.

Medicinari zatražio sliku na temelju mogućih uzročnika bolesti, ali ne i bojenje nije 100% specifični. Većinu uzoraka obrađuje gram bojanjem, i ako se sumnja mikobakterija, kiselog bojanjem. Međutim, neki patogeni su teško vidjeti kada koristite ove metode, Takvi slučajevi zahtijevaju različite verzije mrlja ili druge metode identifikacije. Jer mikroskopski detekcija mikrob obično zahtijeva koncentraciju od oko 1h105 / ml, većina primjerci bioloških tekućina (npr CSF), koncentrira (na primjer), centrifugiranjem prije analizu.

bojenje po gramu. Gram mrlja klasificira bakterije prema tome da li zadržati kristal ljubičaste boje (gram-pozitivna - plava) ili ne (gram - crveno). Osim toga, ona pokazuje morfologije stanica (npr bacili, koki) i njezino povezivanje (na primjer, lanac cluster diploidi). Takve značajke mogu pomoći u predodabira antibiotika, dok čekaju konačne identifikacije. Za proizvodnju Gram mrlja, laboratorijski materijal je grijana i fiksne uzorka na klizača, a zatim obojeni sa uzastopno Bojanje po Gramu ljubičaste, jod, aceton i kontrastnih boje (najčešće safranina).

Kiseline i umjerena (modificirani) bojila kiselina. Takve boje koriste za identifikaciju organizama otpornih na kiselina (.) Mycobacterium I sp organizama umjereno kiselina otporan (posebno Nocardia sp.). Ove boje su također korisne za bojanje rodova Rhodococcus i slično, kao i oocista nekih parazita (na primjer, Cryptosporidium).

Iako detekcija mikobakterija u sputumu zahtijeva samo otprilike 5 000-10 000 mikroorganizme / ml, mikobakterije često prisutne u ljudskom tijelu, na nižim razinama, te osjetljivost je ograničena. Obično nekoliko ml sputum deaktiviranje otopine natrijevog hidroksida i koncentrira centrifugiranjem na kiseline bojanjem. Time se poboljšava dijagnoze, mada neke organizmi umjereno kiseline otporan teško razlikovati od mikobakterije.

fluorescentna obojenost. Takve boje za detekciju patogena pri nižim koncentracijama (1x10⁴ stanica / ml). Primjeri - akridin narančasto (bakterije i gljivice), rodamin auramine i auramine O (mycobacteria) i bijela kalkoflyuor (gljive, posebno dermatofita).

Spoj fluorescentnom bojom s protutijelom protiv patogena (izravno ili neizravno) imunofluorescencije povećava osjetljivost i specifičnost dijagnoze. Međutim, ovi testovi su teško čitati i interpretirati, i nekoliko (na primjer, izravni testova fluorescencije i Pneumocystis Legionella protutijela) su komercijalno dostupni i uobičajeno.

bojenje tinta. Ova boja se koristi za otkrivanje uglavnom Cryptococcus neoformans i druge gljivice u skrivene suspenzijom ispranih stanica (npr CSF taloga). U boji sekundarna domena, a ne samo tijelo, što ga čini moguće vidjeti bilo kapsulu oko tijela poput aureole. Drugim patogenima kao test nije osjetljiv otkrivanja kriptokokalni antigena. Specifičnost metode također ograničena: bijele krvne stanice mogu se pojaviti skrivene patogena.

Wright bojenje i Giemsa. Takve boje koriste za otkrivanje parazita u krvi, Histoplasma capsulatum fagociti i tkiva, stanice intracelularne inkluzije formirane virusa i klamidija trophozoites Pneumocystis jirovecii i određene intracelularne bakterije.

Trichromic bojenje (bojanje Gomori - Wheatley) i željezni hematoksilinskog bojenja. Te boje se koriste za otkrivanje crijevne protozoe.

Dye Gomory - Whitley se koristi za otkrivanje microsporidia. On ne može otkriti crijevna glista jaja, a ne lichinki- pouzdano utvrditi Cryptosporidium. Gljive i ljudske stanice su obojene.

Željezo hematoksilin mrlja diferencirane stanice, aktiviraju stanice i jezgre. helminta jaja mogu biti obojana u tamne boje, što ga čini teško identificirati.

kultura

Test kultura - rast mikroba na krutom ili tekućem povećanje hranjivih sredinom broja organizama olakšava identifikaciju. Kultura i olakšava testiranje osjetljivosti na antibiotike.

Video: Dijagnoza cistitis. Dio 3 052-2506596

Komunikacija s laboratorijem je važno. Iako je većina materijala uzorka stavljene na medij za opće namjene (npr krvi ili čokolade agar), neki patogene zahtijevaju uključivanje određenih nutrijenata i inhibitori ili drugim posebnim usloviy- ako postoji sumnja jedan od tih patogena ili ako pacijent primio antibiotika, potrebno je izvješće u laboratorij. O izvoru izvješća uzorka takvih podataka u laboratoriju mogu razlikovati patogena iz normalne flore.

Uzorkovanje je važno. Pogrešna vrsta obrisak može dovesti do lažno negativnih rezultata. Drvene štapiće šipke premazati otrovno za neke viruse. Štapići s vatom vrhom pamuk toksičnog nekih bakterija i klamidija. Krvi kulture potrebna dekontaminaciju i dezinfekciju kože (npr povidon brisevi jod su ostavljeni da se osuše i zatim se odstrani sa 70% alkoholom). Obično koriste više uzoraka, svaki od odvojenim ograde mesta- poželjno vrši na visini od groznice, ako je to moguće. Normalna flora kože i sluznice, koja raste čak u istom uzorku krvi, tretirane kao inficirane. Ako je dobiveni uzorak krvi iz središnje vene ili arterije, uzorak periferne krvi treba uzeti da bi se razlikovali sustavne bakteremije iz katetera infekcije. Kultura zaraženih kateteri se obično postaju pozitivno brže i sadrži više organizama od oba zajedno kultura periferne krvi. Neke gljive, osobito tla (npr, Aspergillus sp.), Obično ne mogu biti uzgojeni iz uzoraka krvi.

Uzorak treba biti brzo transportirati u odgovarajućem mediju i pod uvjetima koji ograničavaju rast drugih potencijalno zaraziti flore. Da bi se točno odrediti količina patogena treba spriječiti rast patogene dodatne kopije moraju se odmah prevezena u laboratoriju ili, ako je prijevoz kasni, staviti u hladnjak (u većini slučajeva).

Postoje posebni uvjeti za pojedine usjeve.

Anaerobne bakterije ne treba proučavati u test kulture, diferencijacija patogena iz normalne flore često nemogućim. Uzorci Uzorci trebaju biti zaštićeni od zraka. anaerobni transportni medij koriste se za poteza kista. Uzorci Uzorci prikupljeni pomoću šprice (na primjer, sadržaj apsces) moraju se prevoziti u štrcaljku.

Mikobakterije je teško kultivirati. Uzorci koji sadrže normalnu floru (npr ispljuvak), prvo mora biti deaktiviran i koncentrira. Mycobacterium tuberculosis i neki drugi mikobakterije sporo rastu. Rast M. tuberculosis, se javljaju brže nego u tekućinama u krutom mediju. Tipično, korištenje automatiziranih sustava s tekućim medijem može povećati u toku 2 tjedna u odnosu na >4 tjedna na krutom mediju (agar Lowenstein - Jensen). Osim toga, mali broj organizama može biti prisutan u kopiji. Ograda više instance istom mjestu može pomoći povećati vjerojatnost otkrivanja patogena. Tijekom 8 tjedana inokulirane srednje se ne smije miješati. Ako se sumnja atipične mikobakterije, to bi trebalo obavijestiti laboratorij.

Virusi obično uzgojene na razmazima i uzoraka tkiva, obično prevoze u sredinama koje sadrže antibakterijski i antifungalni agensi. Sadržaj uzoraka inokulirane uzoraka u kulturi tkiva, koje podupiru rast virusa i inhibiraju sve druge mikroorganizme. Virusi su vrlo nestabilni (npr zoster virus) su inokulirane u kulturi tkiva unutar 1 sata od prikupljanja. Kultura Standardna tkivo je najosjetljivija. kultura Express tkiva stanica (plak metode: brojenje mrlje na staničnog) mogu pružiti brži, ali indikativno rezultatima. Neki uobičajeni virusi se ne mogu otkriti pomoću konvencionalnih metoda kulture tkaney- zahtijevaju alternativne metode dijagnoze.

Uzoraka gljivice izvedene iz ne-sterilnih sučelja treba inokulirani u mediju koji sadrži antibakterijsko sredstvo. U slučajevima moraju se čuvati 4 tjedna prije odlaganja.

Ispitivanje osjetljivosti

Analize osjetljivosti odrediti mikrob otpornost na antibiotike izlaganjem standardiziranom koncentracije antibakterijskih lijekova. Analiza osjetljivosti može se provesti na bakterije, gljivice i viruse. Za neke organizme, rezultati dobiveni od jednog lijeka predvidjeti rezultate takvih lijekova. Dakle, nije sve potencijalno aktivni lijekovi se testiraju.

Ispitivanje osjetljivosti provodi se in vitro i ne može uzeti u obzir mnogo faktora prirodne uvjete (na primjer, farmakokinetika i farmakodinamiku, značajka koncentracija lijeka u pojedinim tkivima i organima ljudskog tijela imunološki sustav), koji utječu na uspješnost liječenja. Tako su rezultati ispitivanja o osjetljivosti ne uvijek predvidjeti ishod liječenja.

Osjetljivost testa može biti kvalitativno, semikvantitativnog ili upotrebom metoda za izolaciju nukleinske kiseline. Analiza također može procijeniti učinak kombinirane primjene različitih antibakterijskih lijekova (ispitni zajednički efekti).

kvalitativne metode. Kvalitativne metode su manje točne od semikvantitativna. Prema rezultatima inače nepokretne osjetljivosti (S), intermedijer rezultat (I) ili (R) otpor. Najčešće korišteni disk difuzijski postupak (također poznat kao test Kirby - Bauer) pogodan za brzo rastućih organizama.

Antibiotski impregnirane diskovi graška su postavljeni u ploče agara na kojem je testiran mikroorganizam. Nakon inkubacije (obično) 16-18 sati se mjeri promjer zone inhibicije oko svakog diska. Svaki kombinacija antibiotik mikroorganizam imaju različite promjere imaju vrijednost S, I, ili R.

Drugi postupci koji zahtijevaju manje stroga parametara pridržavanje za ispitivanje se može koristiti za brzu provjeru pojedini organizam otporan na određeni lijek ili klasu lijekova ili specifičnih antibakterijskih kombinacije (na primjer, otpornost na oksacilinom na meticilin otporni Staphylococcus aureus, izrada B-laktamaze).

Polu-kvantitativne metode. Semikvantitativna metode određivanja minimalne koncentracije lijeka koja inhibira rast određenog organizma in vitro. Minimalna inhibicijska koncentracija (MIC) je fiksirana u obliku broja koji se zatim može smatrati kao jedan od tri skupine: S (osjetljiv), I (intermedijer) ili (otporne) R. MIC Određivanje se koristi u prvom redu za bakterije, uključujući anaerobe i Mycobacterium ponekad koristi za gljivice, a posebno vrsta candida, izvedene iz sterilnog mjesta. Minimalni neutralizira (baktericidno) koncentracija (MBC) također se može odrediti, ali je tehnički teško, a standardi za tumačenje još nisu dogovoreni. MBC analiza vrijednost, to pokazuje da li se lijek može biti bacteriostatic ili baktericidno.

Antibiotici mogu se otopiti u podlozi ili bujona, koji se zatim doda u mikroorganizma. Sijeva juha - zlatni standard, ali to je dugotrajan jer je samo jedan koncentracija lijeka može se ispitati na jednom cijevi. Efikasniji postupak koristi traku poliesterskog filma trake impregnirane s odgovarajuće koncentracije antibiotika. Traka je stavljen na ploču agara sadrži umetanje materijala, a IPC određuje mjesto na traci koja počinje ingibitsiya- veliki broj antibiotika može se provjeriti na istoj ploči.

IPC omogućuje korelaciju između osjetljivosti mikroorganizma do lijeka i koncentracije lijeka u tkanine, ostvarljiv ne-proteina (bez lijeka). Ako je koncentracija slobodnog lijeka u tkivu veća od MIK, vjerojatnost uspješnog liječenja je visoka. Slično tome, podaci o, S, I i R 'su korelirani s BMD. Obično se temelje na ostvarive koncentracija slobodnog lijeka u serumu ili plazmi.

Metode za otkrivanje nukleinskih kiselina. Ovi testovi zasnivaju se na metode detekcije nukleinskih kiselina sličnih onima koje su korištene za identifikaciju mikroorganizam, ali promjene otkriti poznate gene za rezistenciju ili mutacije. Primjer - mecA, gen za otpornost na oksacilin u S. aureus- da je gen prisutan, organizam smatra otporan na sve-laktamski antibiotici. Iako je poznato mnogo takvih gena, ali njihova identifikacija nema pravo na određen zaključkom o otporu in vivo. Osim toga, budući da oni mogu predstaviti nove mutacije ili druge gene za rezistenciju, njihov izostanak ne jamči osjetljivost na lijek. Iz tih razloga, i zbog toga što su testovi ograničeni u broju i su skupi, oni nisu u širokoj upotrebi. Metode za otkrivanje nukleinskih kiselina nije zamjena standardnog ispitivanja kulture i uobičajenu analizu na osjetljivošću.

Imunološki testovi za infektivne bolesti

Imunološki testovi koriste za otkrivanje antigena antitijela na štetočinje ili antitijela za detekciju patogena antigen u uzorku pacijenta. Liječenje se razlikuje, ali ako je potrebno odgoditi analizu, uzorak, po pravilu, treba staviti u hladnjak ili zamrznuti, kako bi se spriječilo bujanje bakterija.

testovi aglutinacije. U aglutinacije ispitivanja (npr lateks aglutinacija, koaggregatsiya) čestica (ili kapljica lateksa bakterija) spojen na reagens antigena ili antitijela. Dobivene čestice su složeni su pomiješani sa uzorkom (npr CSF u serumu) - ukoliko se želi ili antigen prisutan antitijela u uzorku, vlaženje čestica pojavljuje u obliku aglutinacije, koje se mogu izmjeriti.

Ako su rezultati pozitivni, istraživani biološka tekućina razrijeđena sekvencijalno i testiran. Aglutinacija više razrijeđene otopine pokazuje više koncentracije željeni antigen ili antitijela. Titar pravilno snimati uzajamno aglutinaciju kad je razrijeđen u primjeru otapanja 32 ukazuje na to da se aglutinacija dogodio u otopini razrijeđene 1/32 početne koncentracije.

Video: Laferobion

Testovi aglutinacije obično brže, ali manje osjetljiv od mnogih drugih metoda. Oni također mogu odrediti serotipova određenih bakterija.

fiksacije komplementa. Ovaj test mjeri potrošnju komplementa (komplementa) protutijela u serumu ili CSF. Test se koristi za dijagnosticiranje određenih virusnih i gljivičnih infekcija, osobito kokidioidomikoza. Uzorak se inkubira s poznatim količinama komplementa i antigena. Stupanj komplementa označava relativnu količinu antitijela u uzorku. U određivanju se mogu mjeriti titar antitijela IgG i IgM, ili se mogu modificirati za detekciju specifičnih antigena. Analiza točne, ali je ograničena primjena je dugotrajan i zahtijeva brojne načine kontrole.

imunosorpcije vezivanja. Ti testovi koriste antitijela povezane na enzime, za otkrivanje antigena ili detektirati i kvantificirati antitijela. Imunosorbent testa (ELISA) i imunohistokemija su najviše korišteni enzyme-linked imunosorbent (ELISA). Budući da većina osjetljivih imunoloških visoki, oni se obično koristi za probir. Titri se određeni nizom razrjeđenja uzorka, kao što je u testu aglutinacije.

Analiza osjetljivosti iako obično visoka i može se razlikovati ovisno o dobi pacijenta, serotip mikroba, poput uzorka ili kliničkim fazi bolesti.

Analiza padalina. Ovi testovi mjere antigen ili antitijelo tjelesne tekućine stupnju vidljivog taloženja kompleksa antigen-antitijelo unutar gela (agaroza), ili u otopini. Postoje mnoge vrste analize o oborina (na primjer, Ouchterlony koji dvostruke difuzije, protu-immunoelectrophoresis), ali njihova upotreba je ograničena. Tipično, krvni uzorak pomiješan s ispitivanim antigenom za detekciju protutijela zaštitne, često s gljivične infekcije ili piogeni meningitisa. Kao pozitivan rezultat zahtijeva veliku količinu antitijela ili antigena, osjetljivost je niska.

Western blot analizom. Ova analiza pokazuje antibakterijska antitijela u uzorku materijala iz pacijenta (npr serum, druge tjelesne tekućine), njihovom reakcijom s antigena (na primjer, virusne komponente koje su imobilizirane) na membrane blot.

U Western blot analizom, u pravilu, dobra osjetljivost, iako je često manje nego one testove probira, kao što su ELISA, ali općenito ima visoku specifičnost. To se obično koristi za potvrđivanje pozitivnih rezultata dobivenih u screening analizi.

Tehničke preinake linearno Western blot imunoesej (lia) - analiza rekombinantnog imunoblot (RIBA), koja koristi sintetička ili rekombinacije-Ekspresija rekombinantnog proizvedeni antigeny- i imunokromatografskc ispitivanja koje brzo može provjeriti uzorke mikrobne antigene ili nekih pacijenata antitijela.

Metode za identifikaciju nisu nukleinske kiseline za otkrivanje zaraznih bolesti

Čim test organizam kultura je identificiran, to bi trebao biti identificiran. Metode za detekciju kiselina nisu nukleinske koriste fenotipske (funkcionalna morfološkog) ima mikroorganizme, umjesto genetske identifikacije.

Značajke rast patogena u hranjivom mediju - veličina kolonije, boja i oblika, dati podatke za identifikaciju vrste, a sa Gram bojenja i algoritmu za daljnje analize. Dostupni brojni biokemijski testy- svaku karakteristiku za određene vrste mikroorganizama (npr aerobnim ili anaerobnim bakterijama). Neki procjenjuju sposobnost tijela da koristi razne podloge za rast. Ostale procjene prisutnost ili aktivnost ključnih enzima (na primjer, koagulaza, katalaze). Analize se rade, korak po korak. Test slijed je vrlo raznolika i mogu neznatno razlikovati u različitim laboratorijima.

Metode za detekciju kiselina nisu nukleinske može se temeljiti na Priručniku o automatiziranih sustava ili to može biti kromatografske metode, Neki komercijalno dostupnih setove uključuju odvojene baterije testova koji se mogu izvesti dok koristite jedan uzorak materijala i općenito korisna za dijagnozu širokog spektra mikroorganizama. Takvi sistemi za analizu može biti vrlo točna, ali može potrajati neko vrijeme, do nekoliko dana.

kromatografske metode. Mikrobne komponente ili proizvodi se odvajaju i identificirati primjenom tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC) ili plinskom kromatografijom. Tipično, detekcija je uspoređivanjem masnih kiselina organizma u bazu podataka. Kromatografske metode mogu se koristiti za identifikaciju aerobne i anaerobne bakterije, mikobakterije i gljivice. Točnost ovisi o uzorku kvalitete analize testa kulture i kvalitete podataka, koji mogu biti netočni ili nepotpuni.

Metode za identifikaciju infektivne bolesti na temelju detekcije nukleinskih kiselina

Temelju identifikaciju nukleinskih kiselina pokazuju određene postupke za organizam DNA ili RNA je ekstrahirana iz mikroorganizma. Sekvence može se pojačati in vitro. Temelji se na otkrivanju tehnika nukleinske kiseline su općenito vrlo osjetljiv i specifičan, a može se koristiti za sve vrste mikroba. Rezultati se mogu brzo dobiti. Budući da svaki analiza obično specifična za određeni organizam, kliničar treba znati dijagnostičke mogućnosti i pitati za odgovarajuću analizu. Na primjer, ako pacijent ima simptome koji upućuju na gripu, ali sezona gripe prođe, drži ukupno virusnih dijagnostički test (npr virusne kulture), a ne određenu analizu na gripu je bolje, jer drugi virus (npr parainfluence, adenovirusi) može biti uzrok.

Temelji na određivanju nukleinskih kiselina su kvalitativna ispitivanja, ali postoje kvantitativne metode određivanja za ograničeno, ali je povećanje broja infekcije (na primjer, HIV, citomegalovirus, Human T-limfotropični virus). Ove metode mogu biti korisne za dijagnozu i praćenje odgovora na liječenje.

Metode koje ne uključuju amplifikaciju nukleinskih kiselina se koristi u slučajevima kada je organizam je prvi put otkriven u ispitivanju kulturi prisutan u uzorku u visokoj koncentraciji.

pojačanje. U postupcima pojačanja nukleinskih kiselina uzimaju malu količinu DNA ili RNA, reproducirati ih više puta, i na taj način se može otkriti male tragove mikroorganizma u uzorku. Ove metode su osobito korisne za sredstva koja se teško obrađivati ​​ili identificirani uz korištenje drugih postupaka (na primjer, virus se obavezuju unutarstaničnih patogena, gljivice, mikobakterije, neke druge bakterije), ili tih organizama koje su prisutne u malim količinama.

Ovi testovi mogu uključivati ​​ciljani pojačanje (npr PCR, RT-PCR [RT-PCR] pristranosti sklop pojačanje, amplifikacija transkripcije) pojačanje signala (na primjer, analize razgranate DNA hibrida hvatanje), amplifikaciju uzorka (na primjer, lančana reakcija ligaze , uvodi oblik cijepanje ciklički test) ili postamplifikatsii analize (npr sekvenciranje amplificirani produkt mikropoljem analizu i analizu krivulja taljenja, kao što je učinjeno u realnom vremenu PCR).

Odgovarajući uzorkovanje i pohranjivanje prije dolaska u molekularnoj dijagnostičkom laboratoriju je važno. Od postupaka amplifikacije tako osjetljiv, lako se lažno pozitivnih rezultata od kontaminacije tragova uzorka ili opreme može biti instaliran. Unatoč visokoj osjetljivosti, ponekad postoje lažno negativni rezultati, čak i kad pacijent ima kliničke simptome (npr virusnu infekciju zapadnoga Nila). Lažno negativni rezultati mogu se svesti na minimum

• izbjegavajući korištenje štapićima za mrlja s drvenim štapovima i savjeta o vuni
• brzi prijevoz uzoraka,
• zamrzavanje ili stavljanjem uzoraka u hladnjaku ako transport vodi >2 sata.

Zamrzavanje - tipičan postupak pohranjivanja pojačanje nukleinskih kiselina testovima. Međutim, uzorci se moraju čuvati u hladnjaku, a ne biti predmet smrzavanja ako se sumnja da su nestabilne virusi (npr herpes zoster virusom, virus gripe, HIV-2) ili ako planirate studirati virusne kulture (smrznuti uzorci nisu prikladni za standardne usjeva).