Ispitivanje trombina

Ovaj metodološki pristup je predložio britanskih znanstvenika u 1953 procijeniti stanje sustava hemostaze u hemofilije. Valja napomenuti, međutim, da je predložena metoda u originalu je bio jako daleko od savršenog, tako da za dugo vremena, nije dobio ozbiljnu pozornost. Druga metoda rođenja preživio zahvaljujući Hemker Conrad, koji je napravio brojna poboljšanja u postupku analize u 90-ih godina prošlog stoljeća. Najvažniji modifikacija Hemker K. et al. je upotreba flyuoro- i kromogenih supstrata za detekciju stvaranja trombina, koja značajno povećao reproducibilnost metode. U predmetnom ostvarenju, postupak iz trombina nastaje tijekom reakcije uništava peptidnog supstrata koji uzrokuje otpuštanje fluorofornoj molekule. Promjena intenzitet emisije detektira se pomoću fluoromctru u redovitim intervalima.

Princip metode

Ispitivanje se temelji na održavanju brzinu hidrolize fluorogenih supstrata peptidne veze specifičan za trombin. Određivanje stope fraktura supstrata fluorometru provodi u jažice na ploči s 96 jažica, u kojima je smjesa inkubirana PRP uzorka s aktivatora zgrušavanja. Kao aktivatora korištenje rekombinantnog tkivnog faktora reagensa i kalcijevog klorida i za standardizaciju i poboljšati brzina koagulacije u sistemu ispitivanja doda se fosfolipide. Proučavanje kinetike trombina omogućuje nam procijeniti ravnotežu prokoagulantni i antikoagulant mehanizama.

Reagensi i oprema

• Rekombinantni humani tkivni faktor (1 mol).
• Specifični trombin fluorogenskog supstrata.
• Otopina pufera koja sadrži kalcijev klorid,
• Kalibrator s aktivnošću ljudskog trombina 580 nmol.
• Fluoromctru.

Uzorci krvi za istraživanje

Kao uzorak za snimanje thromboelastogram koristiti BTP. Brojne studije na račun za doprinos trombocita u trombina predlažemo da koristite plazme bogate trombocitima. Test je vrlo osjetljiva na oštećenja i ima pre-analitičke faze studije.

Video: predavanje 29 - Ispitna Generation Metode

tehnika izvedba

ispitni postupak provodi se u skladu s uputama za opremu koja se koristi i algoritam računalni program koji izračunava dinamiku glavnih pokazatelja stvaranja trombina.

Evaluacija rezultata studija

Fluorogenski supstrat koji su specifični za trombin, tako da je promjena intenziteta luminiscencije nakon dodavanja zgrušavanja aktivatora proporcionalan brzini nastanka ovog ključnog enzima za koagulaciju.

Nakon kalibracije standardne količine trombina fluoromctru omogućava izraditi krivulju stvaranja trombina. Studija ocjenjuje vrijeme odgode stvaranja trombina (vrijeme zadržavanja), maksimalni iznos trombina (trombin) Peak vrijeme da se dosegne maksimum (trombin ttPeak), kao endogeni trombina potencijal (ETP).

Interpretacija rezultata istraživanja

Zbog faktora koagulacije je ključni enzim u koagulacijske hemostaze, generiranje trombina testa pojavljuje sastavni vrijedan pokazatelj zgrušavanje krvi.

Rezultati ispitivanja ovisi o načinu aktiviranja koncentracije aktivatora zgrušavanja, i mnogim drugim čimbenicima, tako da mijenjaju uvjete tehnika omogućava da se prilagode otkriti niz nedostataka u hemostatskog sustava. Dakle, dodavanje trombomodulinom u ispitnom sustavu pomaže u otkrivanju hiperkoagulabilna pomake u pozadini leydenovskoy mutacija. Studija stvaranja trombina u trombocita bogate plazme omogućava otkrivanje disfunkciju hemostaze trombocita Glantsmana thrombasthenia, Bernard-Soulier sindroma i drugih.

Aktiviranje najčešće koristi za koagulacijske BPT tkivnog faktora koji omogućava da se ocijeniti stanje koagulacije. Ova izvedba u bolesnika s vremenom hemofilija i druge coagulopathies mjera Lag se produljio, a ETP i Peak trombina smanjena. Intenzitet tih promjena u takvih bolesnika ovisi o aktivnosti faktora koagulacije VIII i IX.

Uzroci pogrešaka

Pogreške Predanalitika fazi studije, Vol. U H. pogrešno doziranje citrata u ogradu venske krvi.

• Nedostaci centrifugiranju na dobivanje PRP uzoraka.
• Kontakt s heparinom proučavao krv iz venskog katetera.
• Hemoliza.

Ostale analitičke tehnike

Trenutno razvio i druge analitičke tehnike koje mogu vizualizirati proces koagulacije, kao što je metoda snimanja rast prostornu ugruška i thromboelastography. Sve takve tehnike vizualizacije zgrušavanja krvi te su u mogućnosti izračunati integralne parametre koagulacije, ali njihova dijagnostička specifičnost i dalje niska.