Endocrinology proteolitički enzimi utjecaj na metaboličku aktivnost stanica mozga i neutrofilnih leukocita albino štakora

Poznato je da proteolitički enzimi (tripsin, kimotripsin i drugi) u nekim slučajevima imaju izraženu protivovospalitelnoedeystvie. U tom smislu, relativno proteaza enzima shirokoispolzuyutsya za liječenje različitih upalnih bolesti skupine: bronhospazam-plućni, ginekološki, stomatološke, opuholevyhprotsessov (2,7,14), kao i u prevenciji upale u kirurgiji (6). U međuvremenu mehanizmi profilaktičko i terapeutsko deystviyaproteoliticheskih fermentv upalni procesi ostayutsyanedostatochno proučavali. Najpotpunije svijetli i uloga literature argumentirovanav nekroze i fibrinolize (trombolitik) učinka proteaza u protuupalnim učinkom (5,6). Međutim, u literaturi je malo dokaza o izravnom učinku proteaza na metabolicheskuyuaktivnost stanica.

Rad je usmjeren eksperimentalnog issledovanievliyaniya tripsin i kalikrein na aerobnogookisleniya enzimske aktivnosti u živčanih stanica i makrofaga igraju vodeću Rolv sprječavanje upale (gematoentsefalicheskiybarer).

Materijali i metode.

Ispitivanja su provedena na 61 bijelih štakora stanovništva Vistarmassoy 200-250 g Ostvareni 10 serija eksperimenata: 6 serija - kontrola koji je studirao dehidrogenaze aktivnost neutrofila leykotsitahi sustavu "neuron-glija" mozgaintaktnyh korteks životinja intraperitonealno 0,85% natrij rastvorahloristogo inaktivirani tripsin i kalikrein (39krys) - serija 4 - eksperimentalno u kojem degidrogenazneyrotsitov aktivnost proučavane intraperitonealnom injekcijom aktivnog tripsin i kalikrein, kao i aktivnosti dehidrogenaza i glikogen sadržaj neytrofilnyhleykotsitah štakori intraperitonealnom injekcijom ispitivanog aktivnyhfermentov (24 životinja). Test droge primijenjene s rascheta50 mikrograma po 100 grama težine životinje. Proučavanje metabolizma nervnyhkletok korteksa neutrofilnih leukocita štakora osuschestvlyalispustya 6 sati nakon intraperitonealne primjene pokusa testa preparatov.Rezultaty su prikazani u tablicama N1 i N2.

Kada histokemijsko studija objekt izucheniyasluzhil dijelu mozga štakora, uzima se u lijevoj peredneytsentralnoy brazdi. Za histokemijskim analizi su pripremljeni kriostatnyesrezy debljine 15 mikrona pri -20^oC u mikrotome- kriostateMK-25 po uobičajenim metodama [9]. Cerebralni korteks stanica mozgakrys laktat dehidrogenaze aktivnost je otkrivena, postupak glitserofosfatdegidrogenazypo Hess, Scarpelli, Pierce [9], a postupak suktsinatdegidrogenazypo Nahlasa [8]. Aktivnost dehidrogenaza sudio pokontsentratsii formazana granule u dijelovima objekata. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili histokemijskim otkrivanje aktivnosti na kriostatskim sekcijama tkiva mozga koji rade inkubirovaliv rješenja u odsutnosti specifičnog substratovokisleniya njemu. Udjelom histokemijskim reakciji pomoću dehidrogenaze osuschestvlyalis cytophotometry pri valnoj duljini od 512 nm, promjera cm zonda0,1, objektiva 40 [1]. Procjena čisto kemijskih reakcija otsenivaliv jedinica apsorbancije. U određivanju aktivnosti neutrofilnih granulocita degidrogenazv krvi štakora bijele istraženi aktivnostSDG [15], LDH i za metodu TPD Hess et al. [8] Predloženi modifikacija Borisova MA et al. [3,4]. Citokemijske vyyavlenieglikogena u neutrofilnih leukocita provedena je metodom Hotchkissa-Shabadash [11,13]. Konačna procjena citokemijske Reakcijska osuschestvlyalipo princip Kaplow L. [14]. Polimorfonuklearni leukociti u zavisimostiot stupanj aktivnosti enzima klasificiran:
1 stupanj - u citoplazmi pojedinačnih peleta sadržanih formazana.Aktivnost enzima zanemariva (slika 1A).
2. stupanj - formazanski granule zauzimati manje od pola tsitoplazmykletok. Ova grupa obuhvaća stanice koje sadrže male (prašine) ili sadrži vrlo blijedo obojene difuzno masa (1b).
3 stupnja - izražena inkluzije leukociti s reakcijskim proizvodima, koji se nalaze u više od polovice citoplazmi neutrofila (Slika 1C).
4 stupnja - izražena stanice s inkluzije reakcijskih produkata zauzeti cijeli citoplazmu neutrofilnih leukocita. Aktivnostfermenta visok (ris.1g). Rezultati istraživanja statistike obrabatyvalimetodami varijacija.

Rezultati i rasprava.

Intraperitonealno štakora uzrokuje porast u tripsin ilikallikreina neurocytes i stanice neyrogliibolshih moždanih polutki aktivnosti enzima LDH aerobnogookisleniya - 27.2% (p < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Rezultati istraživanja prikazani su u tablici obobschenyi. N1.
Učinak na tripsin i kalikrein dehidrogenazne aktivnosti, glija sistemeneyrotsit koru velikog mozga štakora in vivo (M +/- m).

Napomena: brojnik - aktivnost degidrogenazv uvjetne uobičajene jedinice u nazivniku - promjena indeksa u odnosu na kontrolnu protsentahpo. Za nizu eksperimenata N3,4 - kontrola yavlyaetsyaseriya N2. Serija N5- serija N3. Za niz N6 - N4 serije. (+) - p- < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Podataka Usporedba histokemijskim issledovaniyameta paraboličnim aktivnost moždanih stanica i krvnih belyhkrys proučavao djelovanje proteaza identificiranih iste pokazatelje napravlennostizuchaemyh. Parenteralno davanje tripsinai kalikreina životinja u dozi od 50 mg po 100 g tjelesne težine uzrokuje suschestvennyysdvig metabolizam sustav i neuronske-glija i kore golovnogomozga i neutrofila prema povećanim aerobna oksidacija vosstanovitelnyhprotsessov, kao što je jasno dokazano povećanjem aktivnostiSDG, ključnog enzima u oksidativne fosforilacije. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe djelovanje krvi tripsin i kalikrein [12] može se pretpostaviti da smo identificirali citokemijske izmeneniyav stanice korteksu moždanih polutki štakora obuslovlenybiologicheskim djelovanja kinina, što je vjerojatno pronikayutcherez krvno-moždane barijere i potiče u živčanim tkaniaerobnye redoks procesa.

Smanjena aktivnost LDH, ključni enzim aerobnogookislitelnogo enzima u stanicama mozga i krvi belyhkrys po djelovanju tripsina sugerira da je parenteralna primjena fermentpri inhibira glikolizu u stanicama s specifičnost razlichnoyfunktsionalnoy.

Poznato je da je u usporedbi s većinom drugihkletok tijela u svim leukocita glikolitičkih prevraschenieuglevodov prevladava nad oksidativne fosforilacije. Udelnyyves glikoliza je više od 60% ukupnog energeticheskihprotsessov [10].

Tablica 2.
Promjene dehidrogenazne aktivnosti glikogen i njezin sadržaj u neytrofilnyhleykotsitah bijelim štakorima pod djelovanjem tripsin i kalikrein (M +/- m) - (u jedinicama aktivnosti Kaplow)

Napomena: u svakoj seriji issledovaniyi koristi u kontroli 6 životinja. Značajne razlike: p < 0,001.

1. Parenteralno davanje niskih doza tripsina horoshoizuchennymi uz terapeutskim svojstvima, inhibira anaerobne energeticheskiyobmen neutrofila inhibira migraciju leukocita proces ochagvospaleniya i time sprečava širenje vospalitelnogoprotsessa.
2. Učinak malih doza povećava tripsina antitripticheskuyu aktivnostgomogenata cerebralne hemisfere štakora i ima vyrazhennyylechebny protuupalno.
3. Mala doza kalikrein, poput malih doza tripsin snizhayutaktivnost LDH i TPD u neutrofilnih leukocita i moždanim homogenatom stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu mozgakrys aktivnosti koja omogućuje kalikreina u malim dozama, kao i tripsina, koji se koristi kao protuupalno sredstvo.

reference

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry: oprema i metodyanaliza apsorpcija svjetlosti stanica. - Lenjingrad. Znanost, 1979.- 259 str.
2. Baumhakl U.S. Fodemar, H. Kreychova enzim ostryhi kroničnim upalnim procesima u knjizi: sistemske terapije enzima: istraživanja i kliničkoj praksi. Uredio K.Nouza, ZA. Masinovsky, R. Nouza. - München. - Prag. - 1994. - S. 27-30.
3. Borisova MA, Ovcharenko NI, lječilišta AS Neki supravitalnyesposoby citokemijske određivanje aktivnosti sukcinat dehidrogenaza laktatdegidrogenazyi krvnih stanica // Lab. posao. - N 1975.- 12. - S. 723-725.
4. Borisova MA, Ovcharenko NI Shpak SI, et al. Supravitalnyesposoby citokemijske određivanje aktivnosti alfa-glitserofosfatdegidrogenazyi glukoza-6-fosfat dehidrogenaze u leukocitima perifericheskoykrovi // Lab. posao. - 1983. - N 9. - pp 8-10.
5. VF Veselov, VA Protsenko Učinak proteolitičkih enzima uux inhibitora na unos kisika moždanog tkiva štakora i eeantitripticheskuyu aktivnost // UKR. Biochem. Zh. - 1981. 4. N - pp 106-108.
6. Wolf, M. K. liječenje Ransberg enzima. - Moskva: Mir, 1976.- 233 str.
7. Dittmar DF Adneksitisa u knjizi: Sistemsko enzim terapija: studije-niyai kliničkoj praksi. Urednik K., Nouza ZA. Masinovsky, P. Nouza. - München. - Prag. - 1994. - S. 35-36.
8. E. Pierce Histokemija Teorijska i primijenjene. Moskva: Inostr.liter, 1962.- 962 str ..
9. Fedorov NA Normalne hematopoeze i njegovo reguliranje. - Moskva: Medicina, 1976. - 543 str.
10. Shabadash AL Citološki i citokemijske mehanizmi predstavleniyao barijera u stanicama. Zbornik susreta u knjizi: histo-gematicheskiebarery. - Moskva: Nauka, 1961. - P. 381-394.
11. Hamberg U. Utjecaji na kinin sustava proteolizom inplasma // Zbornik radova. Roy. Sol. - London, 1969. - V. 173. - P. 393-406 N 1032.-.
12. Hotchkissa R. D. Microchemical reakcije resalting u staimingof polisaharida struktura u fiksnim yissue pripravcima // Arch. Biochem. - 1948. - V.16. - P. 131-141.
13. Kaplow L. histokemijskim postupak uzevši aktivnost evacuatingleucocyte alkalne phasphatase u razmaza krvi srži // Krvi. - 1955. - v.10. - P. 1023-1029.
14. Klashka F. Oralni enzimes - novi pristup cfncer tritment // Forum. - Med. - Verl. - Ges. - 1996. -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., Hayhol F. aceton fiksacija za cytochemicaldemonstration od dehidrogenase u krvi i koštane srži ctlls // Nature.- 1960. -V.1.- P. 85-86.
16. Sokolova A. Behandlung des multiplen myeloms mit enzimen // Wzarba Y., Klein M.-W., Miehlke i sur. (Ur.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller stajati i Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Munchen. - Njemačka. -. 1996