Fiziologija mikroorganizama: svojstva kulture bakterija, izolacija čistih kultura mikroorganizama

Kulturnih dobara bakterije

sadržaj

Kulturnih dobara bakterije
Izolacija čistih kultura mikroorganizama

Za kulturu (ili) macromorphological svojstva uključuju karakteristike rasta mikroba na čvrste i tekuće hranjivoj podlozi. Na površini od krutih hranjivom mediju, ovisno o usjevu, mikroorganizmi mogu rasti kao kolonija, moždani udar ili kontinuirano travnjak.

Kolonija naziva izolirani nakupina stanica jedne vrste, uzgojene iz jedne stanice (klon). Ovisno o tome gdje je taj mikroorganizam raste (na površini krutih hranjivih medija ili u deblji) razlikovao površini, dubini i donje kolonije.

Kolonije su rasle na površini medija, su različiti: oni su vrsti, a njihovo istraživanje se koristi za određivanje specifične pribor kulture pod studija.

Opisujući kolonije uzeti u obzir sljedeće značajke:
1) kolonija oblik - krug, amoeboid, rizoidnaya, netočno, itd;,.

2) veličine (promjera) kolonija - vrlo mala (točka) (0.1-0.5 mm), mala (0,5-3 mm), srednje veličine (3-5 mm) i velikih (više od 5 mm u promjeru );

3) Colony površina - glatka, grubo, presavijeni naborani, sa koncentričnim krugovima ili radijalno izbrazdan;

4) Kolonije profil - ravno, konveksno, stožastog oblika, itd crateriform;,.

5) transparentnost - tupa, mat, sjajni, prozirna, praškasti;

6) Boja kolonije (pigment) - bezbojan ili pigmentirani (bijele, žute, zlatna, crvena, crna), naglašavaju izbor pigmentu u mediju sa svojim obojenje;

7) ruba kolonija - glatka, valovita, nazubljeni, rese, itd;,.

8) struktura kolonija - homogeno, finog ili krupnozrnast, struychataya- rub a struktura je određena kolonija povećalo ili mikroskop na malim povećanjem stavljanjem Petrijevu zdjelicu s sijanja na mikroskopa dolje poklopca;

9) određivanje konzistencije kolonii- dira petlju: kolonija može biti gusta, mekana, uraslim u agaru, sluznice (za petlju proteže), lomljiv (lako slomljena na dodir s petlje).

Duboke kolonije često nalikuju više ili manje spljoštene lenticels (obrazac ovala sa šiljastim krajevima), ponekad grude vune s vlaknastog dodacima na mediju za kulturu. Formiranje dubokih kolonija često popraćena rupture gustom mediju, ako mikroorganizmi izolirani plinom.

Dno kolonije obično imaju oblik tankih transparentnih filmova, puzanje na dnu.

Značajke kolonije može varirati s dobi, oni ovise o sastavu medija i temperature kulture.

Rast mikroorganizama u tekućim medijima u obzir, koristeći četiri do sedam dana kulture uzgojene u stacionarnim uvjetima.

U tekućem mediju za vrijeme rasta mikroorganizama opaža zamućenja medija, formiranje filma ili ostatak.

Kada se uzgaja na polu (0,5-0,7% agara) hranilistima mobilne mikrobi uzrokuju izrazitu izmaglicu, još uvijek formiraju rastu samo u tijeku sadnja ubod u srijedu.

Često rast klica je u pratnji miris pigmentacije srednje dioksida. Karakterističan miris nekih kulture bakterijskih vrsta povezanih sa stvaranjem različitih estera (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo et al.), Indol, merkaptan, sumporovodika, skatol, amonijaka, maslačne kiseline.

Sposobnost stvaranja pigmenata svojstvena mnogim vrstama mikroorganizama. Kemijska priroda pigmenata raznolika: karotenoida, antocijana, Melanini. Ako pigment je netopiv u vodi, obojeni kultura nalet- samo ako je topiv, obojena i hranjivom mediju. Smatra se da su pigmenti štite bakterije od destruktivnog djelovanja sunca, tako da zrak što je više pigmenta bakterija, osim toga, pigmenti su uključeni u metabolizam tih mikroorganizama.

U prirodi postoji tzv fosforcsccntan bakterije kulture koje svijetle u mraku zelenkasto-plavičaste ili žućkasto svjetlo. Takve bakterije se nalaze uglavnom u rijeku ili morskom vodom. Za luminescentna bakterija - photobacteria -otnosyatsya aerobnih bakterija (Vibrio, koki, štapove).

Izolacija čistih kultura mikroorganizama

Čista kultura se zove kultura koja sadrži mikroorganizam vrste. Izolacija čistih kultura bakterija -Required korak bakteriološkog istraživanja u laboratoriju, na studij različitih mikroorganizama u okolišu i općenito za bilo kakav rad s mikroorganizmima.

Ispitivanje materijala (voda, tlo, zrak, hranu ili druge predmete) obično sadrži klice udruge.

Izolacija čiste kulture nam omogućuje proučavanje morfoloških, kulturnih, biokemijske, antigena i druge značajke, prema ukupnosti koja je određena vrsta i tipova članstva patogena, tj. E. proizveo svoj identifikaciju.

Za izolaciju čistih kultura mikroorganizama se koriste metode koje se mogu podijeliti u nekoliko skupina:
1. Postupak Pasteur - niz razrjeđenja ispitnog materijala u tekućem hranjivom mediju u koncentraciji od jedne ćelije u (volumen povijesnog značenja).

2. Postupak Koch ( „kabelskog ploča”) - a niz razrjeđenja ispitnog materijala u rastaljenom agaru (temperatura 48-50 ° C), a zatim punjenjem u Petrijevoj zdjelici gdje agar skrutne. Iniciranje tvori, u pravilu, tri ili četiri posljednjeg razrjeđenja u kojem bakterije postaje oskudna u budućnosti, uz rast Petrijeve zdjelice pojavljuju izolirane kolonije nastaju iz jedne od izvorne majke stanice. Od izoliranih kolonija u dubini agaru su čiste kulture bakterija na svježem reseeding okoliš.

3. Postupak Shukevich - koristi se za dobivanje čiste kulture Proteus i drugih mikroorganizama koji imaju „puzanje” rast. Sijanje test materijala za proizvodnju kondenzirane vode na dnu nagib. Pokretna bakterija (Proteus) su u stanju hodati Kosa kulture, još uvijek oblici ostaju raste na dnu, na mjestu inokulacije. Precjepljivanje gornje rubove kulture, moguće je dobiti čistu kulturu.

4. Postupak Drigalski - naširoko koristi u praksi bakteriološkog, ispitivanje materijala razrijeđen u epruveti sa sterilnom fiziološkom otopinom i smjese. Jedna kap po prvi materijal se uvodi u čašu sa sterilnim staklenim lopaticom i raspoređuje na površini medija. Zatim, isto lopaticom (ne gori kroz njega u plamena plamenika) napraviti isti urod u drugom i trećem ploče.

Uz svaki inokulacije bakterija na lopatice je manje, i nanesene na trećem šalice, bakterije se distribuirati po površini medija za kulturu odvojeno jedna od druge. Nakon 1-7 dana u inkubatoru vođenje šalice (ovisno o brzini rasta mikroorganizma) u trećem čašu daje svaki klon stanica bakterije izolirane kolonije koje tvori presađuju na agara kako bi se akumulirati u čistu kulturu.

5. Postupak Weinberg. Posebni poteškoće u raspodjeli čistih kultura obaveznih anaerobe. Ako kontakt s molekularnim kisikom ne izaziva trenutnu smrt stanica, usjeve nastale metodom Drygalski, ali onda odmah staviti u šalicu anaerobne. Međutim, većina se metoda uzgoja. Svojoj biti u tome da se razrjeđivanje materijala se provodi u rastali i ohlađena na 45-50 ° agar medija.

Bi serijskih razrijeđenja od 6-10, a zatim se medij u cijevi brzo se ohladi i prelije površinski sloj smjese parafina i vazelina za ulje da bi se spriječilo prodiranje zraka u unutrašnjost hranjivom mediju. Ponekad je medij za kulturu, nakon sijanja i miješanje je prenesena u sterilnu epruvetu i kapilarnog Burri Pasteurove pipete, čiji krajevi su zatvoreni. Ako uspješan uzgoj u cijevi, cijevi Burri, Pasteur pipete anaerobi rastu izolirane kolonije. Upotreba medija za kulturu, pročišćena je da su izolirana kolonije jasno vidljive.

Ekstrakt izolirane kolonije anaerobi cijevi zagrijan lagano zakretanjem u plamenu, s agarom, u susjedstvu zidove i sadržaj epruvete se topi kao agar kolona sklizne u sterilnu petrijevku. Kolona od agara sa sterilnim reže pincetom i ukloniti kolonija petlje. Izvađeni kolonije su smješteni u tekućem mediju, pogoduje razvoju mikroorganizama dodijeljene. Agaru dignut iz cijevi Burri, prolazi plin kroz pamučni sloj.

6. Postupak Hungate. Kada se žele dobiti izolirane kolonije bakterija na posebno visoke osjetljivosti na kisik (strogo aerobnim) koristeći metodu rotirajući Hungate cijevi. Ova rastaljenog agaru cijepljenu s bakterijama i s konstantnom strujom kroz cijev inertnog plina oslobođen nečistoće kisika. Cijev je zatim začepljena s gumenim čepom i postavljeni horizontalno u spona, rotirajući probirku- srijeda s ravnomjerno raspoređena duž stijenki cijevi i tankoslojnu skrutne. Primjenom tanki sloj cijevi ispunjen smjesom plinova omogućuje dobivanje izolirane kolonije jasno vidljive golim okom.

7. Izolacija pojedinačnih stanica pomoću mikromanipulatora. Mikromanipulatora - uređaj koji omogućuje mikropipeta ili posebnim mikropetli uklanjanjem jedne stanice iz kaše. Ova operacija je kontrolirana pod mikroskopom. Na pozornici vlažnoj komori mikroskopskom set u kojem se lijek stavlja „visi kap”. Držači za operativni stativi fiksne mikropipeta (mikropetli), pokret koji je u vidnom polju mikroskopa napravio sa mikrona preciznost zahvaljujući sustavu vijaka i poluge. Istraživač gleda u mikroskop, pojedinačne stanice mikropipete vraća i prenosi ih u sterilne epruvete koje sadrže tekući medij da bi se dobio klon stanica.

LV Timošenko, SN Chubik

Dijelite na društvenim mrežama:

Povezan