Tehnike

Testiranje pribor i uređaje za prikupljanje tjelesne tekućine (Nechiporenko, 1999)

Algotest kvantificirati biološku aktivnost kemijskih spojeva (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Priprema uzorka za više elemenata analize metodoloških uputa ruske Savezne sanitarnoj inspekciji Centar MUK 4.1.1483-03

Formulacija metoda određivanja olova u krvi pomoću ICP-MS izotopa razrjeđenja (Uskrsno et al., 1995)

Postupak višedijelni analiza frakcija krvi

Određivanje sulfa spojevi (Prebsting and Gavrilova Timofeeva postupkom modifikacije za određivanje aktivnosti N-acetiltransferaze) (Pershyn 1971)

Testiranje pribor i uređaje za prikupljanje tjelesne tekućine (Nechiporenko, 1999)

Ispitne posude (cijevi, posude), šprice tip „leptir” sustava (plastične šprice i cijevi).

1. Otapalo: Smjesa 1% HNO₃ i 0,001% Triton X-100. Pripravljen koristeći destiliranu vodu. 10 ml HNO₃ (Reagens stupnja) se doda u 500 ml vode u čistom menzuru od 1 litre. Zatim se doda 1 ml Triton X-100. Nakon otapanja, volumen smjese je podešen na 1 litru.

2. Za ispitivanje plastične šprice, kontejnerima, kapilara u objekt je izrađen i 1 ml otapala se prenese u epruvetu za ispitivanje. U slučaju da je otopina držana u spremnik obrnutom za prekrivanje ili čepa posude za 12-14 sati. U slučaju ispitivanja metalnih igala prolaze kroz 1 ml otopine. Onda se svi analiti pojedinačno testiran za metale sadržaja.

3. Svi izračuni provedeni su na 1 ml otopine. Ukupni sadržaj ukupnog metala u svih uređaja ne smije biti veći od 5% od prosječne ekvivalentne izračunate razine sadržaja metala u biološkom uzorku.

Algotest kvantificirati biološku aktivnost kemijskih spojeva (Barashkov, Kiristaeva 1977)

U potvrda dolje opisanih izumitelja № 557098. dobivene u algotest 1977. g. Iako tehnički, ova metoda nije jako komplicirano, potrebno je ispuniti nekoliko uvjeta, posebice, kako bi se osigurala prisutnost lyuminostata (kontinuirano fluorescentno osvjetljenje fluorescentne svjetiljke s intenziteta 3700 erg / cm² sec, temperatura inkubacije 29 ± 3 ° C), a imaju iskustva s algama.

Test mezofilne organizam je soj zelenih algi Chlorella pyrenoidosa 82 iz zbirke kafića. MSU mikrobiologija. Ona se uzgaja 3 dana pod stalnim svjetlom, žarulje sa žarnom niti s intenzitetom od 10. siječnja⁵ ergs / cm² s na 28 ° C puni Tamiya okoliš urea i dodao mikroelementi u Arnon-4 otopinu.

Prije eksperimenta algi stanica (mid-log fazi rasta) se odvaja od medija centrifugiranjem (3 tys.ob / min, 1200 x g, 5 min), ispere s 0,01% natrij NaCl i razrijeđen 5 puta Pretpostavka-1 medij s pH oko 7,0, potpuno bez organskih aditiva.

Optimalna koncentracija algi stanica za maksimalnu osjetljivost (10 May⁵ - 10. travnja⁶/ Ml) na 15-40 jedinica odgovara „indeks silika gel” (SP), koja je jednaka masi suspenzije u CSC finog silicija mg / ml s istim optičke gustoće pri 578 nm kao algi suspenzije.

Pri procjeni toksičnost tvari ili smjese su moguće opcije koje se odnose na topivosti ispitne tvari. U vodi topljivi sastojak se uvodi u kašu u koncentracijama koje se razlikuju od jednog reda, na primjer, 10, 1, 0,1, 0,01 mg / ml. Netopljivih u sverhrastvoritele davati, na primjer, dimetilsulfoksid (DMSO) ili dimetilformamid (DMF). koncentracija Sverhrastvoriteley ne smije prelaziti 3% zbog svoje unutarnje toksičnosti.

Kuhana eksperimentalni i kontrolni s identičnom početnom slurry SP₍₁ izlivena u 20-25 ml širokim otvorom posude ili Erlenmey-EPA (50-100 ml), ili u standardnim epruvetama na policama prozirne, zatvorene pamuk i inkubira na 85-95 lyuminostate sat. Tehnički zgodan i zadovoljavajući za statističku obradu ponoviti svaka opcija 5 puta.

Nakon inkubacije posude (ili cijevi) se stavi u kupelji ultrazvučne čišći i ultrazvučno ozračuje tijekom 10-15 sekundi s 100 W kako bi se dobila homogena suspenzija. Oni definiraju JV iskustvo i kontrole (JV_K) Apsorbancijom na 578 nm (ili broj stanica). Izračunavanje koje je izvršeno pomoću formule:

gdje T%₂ - postotak promjene kulture udvostručuje vrijeme. Pozitivan rezultat ukazuje na prisutnost usporava rast i toksični učinak, negativni - stimulirajući učinak.

Kritična koncentracija (C_cr) Jesu li grafički. Ordinatu predstavlja izračunate vrijednosti% T₂ (Iznad pozitivne 0 -, niži - negativne), a na apscisi - koncentracije ispitivane tvari na logaritamskoj skali. Mjesto križanja linijsko segment između točaka za veće i manje vrijednosti% T₂ 5% stupanj, paralelno s osi apscisa daje vrijednost K_cr- 5% je prihvaćena kao kritične razine s obzirom na činjenicu da su neke tvari ne uzrokuju jasan stimulativni učinak i smanjiti ispod 5 povećava relativnu pogrešku u određivanju.

Vrlo povoljno izraz rezultat je, osim K_cr, Izračun uzorka toksičnost u odnosu na toksičnost bakrenog sulfata u „Tox” (T_s), Koji su prikazani u istom nizu eksperimenata: T_s K =^s_cr/ K_cr. Izbor kao modela toksičnosti standarda CuSO₄ s obzirom na činjenicu da se taj materijal zadovoljava sljedeća dva uvjeta: 1), što je najčešće kao model fluora i 2) pruža jasnu vrijednost K^s_cr na minimum razlika između toksičnih i poticanje koncentracijama.

POTE: Od pojave selektivna toksičnost, slijedi da su univerzalni ispitivanja organizama ne postoje. Poznati testove kao što su test s Daphnia, na temelju određivanja vrijednosti LD₅₀, koji je praktički omogućuje postavljanje kritične koncentracije ispitivane tvari, tj višu organizma koja bitno djelovanje je bilo spriječeno. Osim toga, test organizam za eksperimente bi trebao biti u standardnom fiziološko stanje u bilo koje doba godine. Ovaj zahtjev je najprikladniji za pojedine stanice zelene alge.

Korištenje mezofilnih sojeva Chlorella omogućava da se poveća osjetljivost biološkom testu u odnosu na bilo koji drugi za više od dva reda veličine, na vrlo jednostavan način. Unaprijed soj rasle u kompletnom mediju s ureom, koja je mesotrophic. Stanice su zatim isprane bez medija i prebačena u loša autotrofni Uvjeti koji se podvrgava dvostruke fiziološke šoka.

Potreba za uvođenje interne standardne toksičnost proizlazi iz nemogućnosti obavljanja pokusa u različitim godišnjim dobima u istim uvjetima. K^s_cr To varira od pokusa eksperimentirati, ali u većini slučajeva je oko 3 mg CuSO₄/ L.

Priprema uzorka za više elemenata analize metodoloških uputa ruske Savezne sanitarnoj inspekciji Centar MUK 4.1.1483-03

Za pripremu uzorka pomoću ICP-MS da se koristi jela fluoroplastic temeljito ispere ultrazvučnoj kupelji razrijeđena 1: 1 HNO₃ i isprane tri puta s deioniziranom H₂O.

Izbor, skladištenje i priprema uzoraka

kosa ošišan na stražnjem dijelu glave, u iznosu od >0.1 g, obrađen je acetonom 10-15 minuta, ispere 3 puta s deioniziranom H₂oh.

nokti cut s obje ruke, i tretira se na isti način. Oba objekta su pohranjeni u papirnate omotnice.

krv Ulnarni iz vene u količini >1 ml pohranjene u hladnjaku 3-5 dana ili u hladnjaku (18 ° C) ili liofilizira. Za dugoročno skladištenje uzorci su stavljeni u jednokratnu polipropilenske cijevi s tijesnim poklopcima.

Isto tako, tretiraju krv u pripremi lijekova upakirana crvena krvna zrnca, plazma i sera, a uzorak mlijeka, sjemena, limfa, slina.

urin (Jutro ili dnevno) u količini koja nije manja od 5 ml se stavi u plastičnu posudu zatvorenoj u hladnjaku do 3 dana ili smrznuti.

biopsije mišića, kože, epitela, jetra, i drugi. odmah nakon pripreme se izvaže, stavljena je u zataljenu plastičnim posudama i čuva u hladnjaku tijekom 3-5 dana ili smrznuti.

Uzorci kostiju i zubi stavi se u zatvorenoj plastične ambalaže iz laboratorija.

pripravci amino kiseline, multivitamine, BAS i sirovina za njihovu proizvodnju dolazi u proizvođača paketa. Najmanja težina 10 g čvrstih pripravaka, tekućih - 100 ml.

Otvoreno razgradnja uzoraka

Kosa, nokti i drugi. Čvrsta uzorci. Dio uzorka stavi se u Teflon cilindru se doda 0.2-1.0 ml koncentrirane HNO₃, zaštitni poklopac laboratorijske film i stavljen u termobloka na 0,5-1,0 sati na 115 ° C do potpunog otapanja. Uzorak otopljeni kvantitativno se prenese u epruvetu za mjerenje i vode od ispiranja je podešena na volumen od 10 ml, zatim - analize.

Video: Max OT. tehnike treniranja

tekući uzorci. Točno izvagane uzorke (0.1-0.5 mL) stavljena je u teflonsku cilindru, određivanje težine epruvete uzoraka razlika mase prije i nakon priprave uzorka. Doda se 0,3-1,0 ml koncentrirane HNO₃ Uzorak i homogenizirane kao što je gore opisano.

Kako bi se spriječilo taloženje proteina i nadoknaditi uzorka visoke viskoznosti ostavljena jednostavnu razrjeđivanje uzorka deionizirane vode, nakon čega slijedi zakiseljavanje s faktorom razrjeđenja od najmanje 1: 100.

mikrovalna raspadanje

Precizno izvagana uzorak se stavlja u teflonskom košuljice, 5 ml HNO₃ i staviti u mikrovalnu pećnicu. Raspadanje se provodi od strane proizvođača programa (obično 5 minuta na 200"C) se kvantitativno prenese u epruvetu i volumen podešen na 10 ml s vodom. Uzorak 1 ml podesi do volumena od 10 ml 0.5% HNO₃ i analiziraju.

Pusti izravno izbor alikvota razgradi volumenu uzorka od 0.1-0.5 ml. Za kompenzaciju pogrešaka prije raspadanja razrjeđivanjem uzorka uveo internom standardu (U, Rh) Na koncentraciju analita u konačne otopine je oko 10 g / l. Rješenje za unutarnji standard treba dodati na sve pojedinačne i umjernih rješenja.

Ispravak izobara preklapanje, polivalentni prekrivanja i prometa

Tehnike miješanje otkriven ispravljanje pogrešaka određivanjem standardne dodatak i mjerenje serijski razrijeđeni niz uzoraka.

korekcija izobarni Višeslojni oglasi proizveden automatski, u skladu s programskim paketima instrumenata za ICP-MS. Točne koeficijenti korekcije određuje eksperimentalno.

korekcija polihidridni prekrivanja zahtijeva pažnju operatora kako bi se uklonili smetnje. Uređaji s reakcijske ćelije se odstrani većinu poliatomske preklapanja u principu. Specifične metode za različite izvedbene ručno ukloniti smetnje su poznati i prikazani su u odgovarajućim uputama za postojeće uređaja.

buka prometa ispravljanje maksimalnu moguću razrjeđivanje i pozadina normalizacije kiseline. Korištenje internog standarda eliminira uzorak pogreške razrjeđenja i ugraditi mnoge učinak matriksa na plazma i iona toka.

Umjeravanje instrumenata, mjerenja i analize mjerenja i obavljanja unutarnje operativnu kontrolu opisano u odgovarajućim uputama za instrument. proizvođača opreme za obavljanje odgovarajuću obuku operatera u okviru ugovora za nabavu opreme.

Formulacija metoda određivanja olova u krvi pomoću ICP-MS izotopa razrjeđenja (Uskrsno et al., 1995)

Precizno izvagana uzorak pune krvi dva 0.5 U jednoj dodano približno 100 mg otopine (oko 100 mikrolitara) od SRM 983 standarda koji sadrži 92.15 u.% ²⁰⁶Pb na konačnu koncentraciju od oko 1 mg Pb/ G. Se u dva alikvota doda se 2 ml koncentrirane UltraPure HNO₃ i spali ih u mikrovalnoj pećnici u ponderiranih PTFE plovila.

Ostaci ohladi, prenese u epruvetu od 15 ml i razrijedi se na 10 ml s vodom. Alikvoti su analizirani ICP-MS i određivanje omjera ²⁰⁸Pb/²⁰⁶Pb. koncentracija Pb u izvornom uzorku je izračunata prema formuli:

gdje je [Pb] - koncentracija Pb u nepoznatom uzorku u ng / g,

K - omjer relativne atomske mase prirodno Pb relativne atomske mase Pb u uzorku dodano ²⁰⁶Pb (A_r = 206,063)

c_a - koncentracija Pb u uzorku dodano ²⁰⁶Pb u ng / g,

m_sp - težina (g) dodana je otopina ²⁰⁶Pb,

m_sm - težina (g) iz izvornog uzorka,

0,0125 - relativni sadržaj ²⁰⁸Pb u uzorku s dodatkom SRM 983

0.921497 - relativni sadržaj ²⁰⁶Pb u istoj otopini,

208/206 (s) - omjer u otopini doda se,

₂₀₆ i a₂₀₈ - prirodni sadržaj ²⁰⁶Pb i ²⁰⁸Pb u izvornom uzorku.

Postupak višedijelni analiza frakcija krvi

za plazma obično u standardna struktura plastična cijev koja pripada antikoagulans (heparin-Na ili -li sol, K₂-EDTA Trilon B = 9NC Na citrata, oksalata) Dobiti uzorak krvi. Stanice treba se odvojiti što je prije moguće centrifugiranjem, kao kratkotrajne učinak heparina i antikoagulansa značajno izmijeniti sastav elemenata seruma. Za dugoročno skladištenje uzoraka krvi u hladnjaku je neizbježan proces hemolize dogodi, au zamrzivaču krvnih stanica su uništeni.

za sera dopustiti uzorak krvi zgrušati ( „Curl”), nakon čega se odvoji fibrinski ugrušak zajedno sa stanicama. Ako želite dobiti Filtrat bez proteina (BBF), a zatim i 1 dijela krv dodana 9 dijelova 5% TCA (TCA). Proteinski talog se ukloni centrifugiranjem (2 teor. Okr / min, 10 min). Za određivanje elemente supernatant je korišten.

0,5 ml krvi ili plazme ili seruma se stavi u mikrovalnu bočicu doda se 4,5 ml 30% HNO₃. sadržaj mineralizirana (Na primjer, u mikrovalnoj pećnici firme Berghofa Speedwave ™ MWS-2 Program P₆ postupak u 3 koraka (25 min)).

Mineralizirana Otopina se razrijedi s 5% HNO₃ 10 ml (20-struko za razrjeđivanje), a koji se koriste za određivanje ICP-MS.

primjedbaU slučaju rezultata izvan opsega pojedinih elemenata analita razrijeđen. Sva razrjeđivanja u obzir u posljednjim minutama rezultata.

Određivanje sulfa spojevi (Prebsting i Gavrilova Timofeeva postupkom modifikacije za određivanje aktivnosti N-acetiltransferaze) (Pershin, 1971)

reagensi:

1) 15% trikloroctene kiseline (TCA)

2) 0,5% -tna otopina Nano₂

3) Zasićena otopina CH₃COONa (1 dio soli se otopi u 2,8 dijelova H₂O)

4) 0.5% otopina acetiliranog H-kiselina (1,8-aminooksinaftalin-3,6-disulfonska kiselina) (pripravljen na dan eksperimenta),

5) 7-10% otopina HCl

6) Glavni Standardna otopina

10 mg sulfadimezin norsulfazola ili staviti u odmjernu tikvicu od 100 ml i 2,1 ml 0,1 N NaOH potpuno otopiti sulfanilamida. prekrije sa destilirane H₂O na visini, tj prije koncentracije lijeka u 100 ug 1 ml otopine. Otopina je pohranjena u hladnjaku.

Kalibracijska krivulja je konstruirana koristeći niz rješenja za proučavanje lijeka uzetog za analizu photoelectrocolorimeter (FEC) s plavom filtar, na primjer, 10-8-6-4-2 ug / ml.

Predmet daje 1-2 tablete od sulfa lijekova, i uzima svakodnevno urina. Cijev je ispunjena s Doda se 0,2 ml urina 2 ml otopine №1 + 1 № 5 ml i 6,8 ml destilirane H₂O. Nakon miješanja i filtriranje 1 ml filtrata odgovara 0,02 ml urina.

Analiza slobodnog sulfanilamida. U epruveti se ulije 2,5 ml filtrata urina ulije 0,1 ml otopine № 2, miješa se nakon 10 minuta se prelije se 1,5 ml otopine № 3 i ponovo se promiješa. Odmah, 0,25 ml otopine № 4. Nakon što se temeljito miješanje ružičastog obojenja. Nakon 15 minuta, intenzitet se mjeri na FEC s plavim filterom.

Radni standardi tretiraju Tate isti. Do kalibracijske krivulje je izračunata koncentracija slobodnog lijeka, uzimajući u obzir sve razrjeđenja.

Analiza ukupnog sulfanilamida. Po primanju lijeka u tijelu subjekta acetilirani N-acetiltransferaze. Ovaj dio se može utvrditi tek nakon hidrolize. U epruveti se ulije 2,5 ml uzorka i 0,25 ml № 5. Slično raditi sa standardnim otopinama. Cijev sa smjesom stavi u kipućoj vodenoj kupelji tijekom 30 minuta. Nakon hlađenja, volumen tekućine u cijevi se podesi na 2.5 ml destilirane H₂O. Daljnji rad s otopinom prema metodi za određivanje slobodnog sulfanilamida.

Kalibracija krivulje konstruirane sa standardnom radnom otopinom, nakon hidrolize izračunava ukupna količina lijeka (slobodni i acetiliranog) u uzorku. Nakon oduzimanja količine slobodnog lijeka dobivenog u količini pripravka acetiliranog %% odnosu na ukupno.

Medicinska bioneorganika. GK ovca