Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.

Moskva, Savezni centar za sanitarnu inspekciju Ministarstva zdravstva Rusije, 1999UtverzhdayuGlavny gosudarstvennyysanitarny vrachRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO23 listopada 1999 godaData uvod u siječnju 2000 goda4.1 -1. Metode kontrole. KEMIJSKA FAKTORYOPREDELENIE MASS KONTSENTRATSIIMIKOTOKSINOV prehrambenih sirovina i PRODUKTAHPITANIYA. Priprema uzorka METODOMTVERDOFAZNOY EKSTRAKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMUK 4.1.787-991. Razvijen od strane Federalnog centra za državne sanitarne i epidemiološke MinzdravaRossii (VB Skachkov, IV Bragin, kraljica NV) i CJSC"BioKhimMak CT" (Vodeći istraživač Vasiyarov GG, GS starshiynauchny zaposlenik Aleksejev, viši istraživač OsokinD.M., Doktor kemijskih znanosti Staroverov SM.). 2. Odobreno i staviti na snagu glavni gosudarstvennymsanitarnym liječnik Ruske Federacije od 23. listopada 1999. godine D.3. Vpervye.1 upoznao. Svrha i područje primeneniyaNastoyaschie Metodicheskieukazaniyaustanavlivayutsposobypodgotovki uzoraka prehrambenih sirovina i hrane produktovmetodom čvrste faze ekstrakcije posleduyuschegohromatograficheskogo za mikotoksina analize i sigurnosnih studija dlyaprovedeniyalaboratornyh pischevoyproduktsii gossanepidsluzhby institucije Ruske Federacije, kao i dlyapredpriyaty i institucije koje se bave kontrola kvalitete iissledovaniya prehrambenih sirovina i prehrambenih proizvoda za dosljednost s SanPiN 2.3.2.560-96 "Kkachestvu higijenski zahtjevi i sigurnost prehrambenih sirovina i pischevyhproduktov" i akreditirani u skladu s utvrđenim poryadke.2. Metoda za pripremu uzoraka probPodgotovka obuhvaća sljedeće dijelove: - vađenje test objekt pruža ekstrakt poluchenieedinogo sadrži sve mikotoksina normalizirane vdannom predmet SanPin 2.3.2.560-96-- ekstrakta pripremu uzorka pomoću krute faze ekstrakcije, vklyuchayuschayapredvaritelnuyuochistku kontsentrirovanieiokonchatelnuyu pročišćavanja uz koncentraciju uloške Diapak.3 , Zahtjevi bezopasnostiPri Reagensi i otapala i veschestvamineobhodimo skladu sa sigurnosnim zahtjevima koje dlyaraboty otrovni, korozivne tvari i zapaljive POGOST 12.1.005-88.4. Uvjeti priprave probProtsessy obavlja priprema i obradu uzoraka otopine provodi vnormalnyh uvjetima pri temperaturi okoline od 18 - 22grad. C.5. Aflatoksin B1 (AP-B1), zearalenon (Zon), deoksinivalenon (DON) i T-2 toksin (T-2), 5.1. Oprema, materijali, reaktivyTablitsa 1 + ------------------------------------ + ------ --- + --------- + --- + --- + | Oprema, materijali, reagensi | AT-B1 | Zon | DON | 2 || T i rješenja + ---- + ---- + ---- + ---- + | ||| 1 | 2 | 1 | 2 | | ||| var. | Var. | Var. | Var. | | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | uzorci tipa vibracijski | + || AVU-6C TU 64-1-2451-78 ili magnetska | || -magnetic ili mehaničkom miješalicom | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | analitička vaga s točnošću od | || + težio 0,01 g +/- | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | tipa Mill "ciklon" QC-114 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | rotacijski uređaj za isparavanje (TS-1m2, | || + W ili 25-1173.102-84 al.) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | uređaj za vakuum | || + o -0.7 mm Hg (Vodenim mlazom | || pumpe, vakuumske pumpe ulja, | || Medicinska sisaljka) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | vakuumski uređaj za trening | || + uzorci (vakuum cijev s više otvora, s) prijemnika | || nadimci suđenje kapacitet manji od | || 10 cu. vidi | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | uređaj za isparavanje uzoraka | + | + | - | - | - | - || struja dušika uz zagrijavanje oko ||||| | || 40 stupnjeva. C (suhi zrak je poželjno ||||| | || kupka) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uložak Diapak A-3, | + | + | + | + | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uloška Diapak AU-3, | - | - | - | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uloška Diapak P-3, | + | + | + | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uložak Diapak H, | + | - | + | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ZAO ||||| | ||"BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uložak Diapak C, | - | + | - | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | medicinske kliješta, 15 cm | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | metal lopaticom ili porculan | + || žlica | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | ravnog dna posude s koničnim | + | + | + | + | - | - || čepovi s kapacitetom od 50 kubičnih metara. cm ||||| | || GOST 25.336 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | ravnim dnom konične tikvice | + || (Erlenmeyerovu) zagušenja vmestimos- | || TEW 250 ili 300 cc. cm | || GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Buchner tikvica kapaciteta 500 kubnih metara. | + || See | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | dimnjak kapacitet Bunsen | || + 200 cu. vidi | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | toka kapacitet za odvajanje | || + 250 cu. vidi GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ostrodonnye boce s čepovima na | + || GOST 25336 s izmjenjivih konu- | || som 14/23 kapacitet 5, 10 | || 25 cu. vidi | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kruške u obliku boce s čepovima na | + | + | + | + | - | - || GOST 25.336 s izmjenjivim konu- ||||| | || som 14/23 kapacitet od 10 i 25 kubičnih metara. ||||| | || vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | mjerni valjci s kapacitetom od 25, 50, | || + 100 cu. cm 2 stanice, prema GOST 1770 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | microsyringe s kapacitetom od 100 kubnih metara. mm | || + (ili pipete završio GOST | || 20.292 izvođenje 4 ili 5, 1. razvrstavanju |. || sa točnost kapacitet 1 cc) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | filtar papir (gusti, uski || - || - | + | + || koporistaya polako filtriranje ||||| | | | tipa sedimenta tanka "plava ||||| | || Feed") ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Nesterilizirana medicinska pamuk, | || + x / b | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | acetonitril tekućinskom kromatografijom | + || grafija, OP-3 FSR TU | || 6-09-14-2167-84, otkloniti | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | aceton, visoke čistoće, prema TU 6-09-3513-75 | - | + | - | - | - | - || OP-2, otkloniti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | benzen, stupnja čistoće reagensa, prema GOST 5955-75, vyder- | + | + | + | + | - | - || zhanny preko Na SO, otkloniti ||||| | || 2. travnja ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | heptan, heksan, XQ, TU | + | + | + | + | - | - || 6-09-3375-78 ili petroleter ||||| | || (frakcija: 70 - 100), stupnja čistoće reagensa, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 2-propanol (izopropanol), | - | - | - | - | + | + || XQ, TU 6-09-402-75, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | ledena octena kiselina, xv u | + | + | + | + | - | - || GOST 61-75 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kloroform, medicinske, kontinuirana | - | - | - | - | + | + || preko CaClz, otkloniti ||||| | || 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | metilen klorid (diklormetan), | + | + | - | - | - | - || održati tijekom CaClz, ||||| | || 2 ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | dietil eter, održati tijekom | - | + | - | - | - | - || NaOH, otkloniti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | etil acetat (etil acetat + || || - || - || kiselina), stupnja čistoće reagensa, u skladu s GOST 22300-76, || ||| | || održati iznad Na CO i rektifitsi- ||||| | || 3. veljače ||||| | Rowan || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | natrij sulfata, bezvodnog kakvoće reagensa, od | + | + | + | + | - | - || GOST 4166-76 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | natrijev klorid, stupnja čistoće reagensa, prema GOST 4233-77 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | destilirana voda | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | ekstrakciju - 84% acetonitril u vo | + || de, 840 kubičnih metara. Pogledajte acetonitril dovo- | || dyatsya na 1 litru vode i polucha- | || etsya destilacijom s vodom vodenom | || a - acetonitril (1: 4) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 33% benzen u acetonitrilu - miješati | + | + | + | + | - | - || 30 cu. Vidi benzen i 60 kubičnih metara. Pogledajte aceton ||||| | || tonitrila (1: 2) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 20% acetonitrila u benzenu - 20 cu. | + | - | - | - | - | - || cm acetonitrila razrijedi benzen ||||| | || do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 2% octene kiseline u benzenu - 2 | - | - | + | - | - | - || cu. vidi razrijeđena octena kiselina ||||| | || benzen do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 5% octene kiseline u benzenu - 5 | - | + | - | - | - | - || cu. vidi razrijeđena octena kiselina ||||| | || benzen do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 10% etil acetata u benzenu - 10 cu. | - | + | - | + | - | - || cm acetat razrijedi s benzenom ||||| | || 100 cu. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 25% heksana u zračnom - 25 cu. vidi | - | + | - | - | - | - || heksana razrijedi s dietil eterom ||||| | || do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 10% aceton u diklormetanu - 10 cu. | - | + | - | - | - | - || cm aceton razrijedi diklormetanom ||||| | || do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 20% acetona u diklormetanu - 20 cu. | - | - | - | - | + | - || cm aceton razrijedi diklormetanom ||||| | || do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + 5.2. Metoda pripreme probOpredelyaemye mikotoksina dobiven ekstrakciju iz uzorka mase prisootnoshenii uzorka - volumen ekstrakciju od 1: 5. Kada opredeleniiaflatoksina B1 i zearalenon je pročišćen vodenog ekstrakta na -atsetonitrilnogo glave Diapak A-3 na ulošku kontsentriruyutmikotoksiny Diapak P-3, osušen isparavanjem zaostale vode i ponovnog otapanja iposle vrši završno ochistkuna svrdlo Diapak H (Diapak C - u slučaju kukuruza i proizvoda iznee ). Frakcijskom eluiranja Dobivene su dvije frakcije, soderzhaschieaflatoksin B1 i zearalenon, spreman za kromatografsku određivanje deoksinivalenon analizu.Pri i T-2 toksin provodyatpredvaritelnuyu čišćenje voda - acetonitril ekstrakt napatrone Diapak AU-3 i koncentrira isparavanjem do suhog. Poslepererastvoreniya Konačno pročišćavanje se izvodi na DiapakN spremnika. Frakcijskom ispiranje Dobivene su dvije frakcije, a soderzhaschiedezoksinivalenol T-2 toksina, spreman hromatograficheskomuanalizu.Dlya stupanj provjere valjanosti za dobivanje uzorka iutochneniya mikotoksina ekstrakcijom analize probymetodom standardnih aditiva u izvornom ekstrakta. Osnovnyeharakteristiki priprema uzorka čvrstog ekstraktsiiprivedeny u tablici. 2. Tablica 2OSNOVNYE priprava uzorka KARAKTERISTIKE + ---------------- + --------------- + --------- - + ------------------- + | Mikotoksina | Vrijeme | Stupanj | relativna ||| probopod- | ekstrakcija, | prosječna kvadratiche- ||| kuhanje min. | % | Odstupanje Skoe,% | + ---------------- + --------------- + --------- - + ------------------- + | aflatoksina B1 | 120 | 75 | 20 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | Zearalenon | 120 | 70 | 20 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | deoksinivalenon | 90 | 85 | 10 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | T-2 toksina | 90 | 85 | 10 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + postići potreban stupanj ekstrakcije tochnovypolnyat zahtjevima kvalifikacije za organskim otapalima, a ihpodgotovke priprema rješenja navedena u sek. 5.1.Algoritm potrazi za mogućim gubicima ciljnog uzorka mikotoksina pripodgotovke dan je u Dodatku 1. ovog Metodicheskimukazaniyam.5.3. Pripravak koncentriranja patronovPatrony Diapak su plastične stupac koji sadrži 1 ili 3 kubičnih metara. cm sorbenta.5.3.1 hermetički pakira. Slaganje uložak Diapak-3Vskryt izlazne linije uložak Diapak A-3, uklanjanje polimernuyuzaglushku. Postavljanje uloška uspravno uskom kontsomvniz prikladna naprava za skupljanje i evakuacijom elyuata.Ostorozhno otvoriti poklopac uloška polimerni da formiraju gornji sloj sorbent rovnyygorizontalny točenje popatronu i popraviti pomoću malog pamuk tampona.Podklyuchit vakuumskog uređaja za pražnjenje vakuum i na obespechitpodachu uloška .Kontsentriruyuschy uložak Diapak A-3 jednokratnu iregeneratsii ne podlezhit.5.3.2. Koncentriranje uložak Diapak AU-3Podgotovka koncentriranja uložak Diapak AU-3 provoditsyaanalogichno n. 5.3.1.Kontsentriruyuschy uloška Diapak AU-3 jednokratnu iregeneratsii ne podlezhit.5.3.3. Koncentriranje uložak Diapak P-3Set uložak Diapak P-3 u vertikalno podhodyascheeustroystvo za vakuum i otvoriti gornji kryshku.Suspendirovat sorbent uz miješanje sa staklenim štapićem u 10kub. Pogledajte benzen, pustiti stajati sorbent i propustiti na slabomvakuume, izbjegavajući zarobljavanje zraka u sorbensa posledovatelnopo 10 cu. cm benzena i acetona atsetona.Sohraniv sloja od približno 2 cm, za uvođenje porozno polimernyyfiltr (dostupan na kit) i čvrsto je štapić verhnemusloyusorbenta.Zatempropustit preostalog aceton i uzastopno s 10 cc. cm ekstrakcije i ekstrakcije -voda smjese (1: 1), koji sprječava ulaz zraka u sorbensa s skorostyu2 - 3 kapi sekundu.Sohraniv sloja za ispiranje traje oko 2 cm, onemogućiti vakuumu prigušiti prvi uložak gornji poklopac, a zatim (posleprekrascheniya kapanje) i donji poklopac. Tako bolest pripremili uložak može biti pohranjena tijekom radnog dana, a suši prisluchaynom je u radno stanje prokachivaniem10 kocku. cm ekstrakciju smjesa - voda (1: 1) .Kontsentriruyuschy uložak Diapak P-3, za višekratnu upotrebu regeneracije ipodlezhit sheme, kao što je gore opisano, nakon što je provedeniyaprobopodgotovki.5.3.4. Koncentrirajući Diapak NSnyat glava sa trupac Diapak H čepovi proći kroz njega uz pomoć 5 cc štrcaljke. vidi benzen i brtvljenje oba kraja kako patrona.Podgotovlenny uložak može biti pohranjena u techeniesutok na temperaturi ne višoj od 25 ° C. C.Kontsentriruyuschy uložak Diapak H višekratnu upotrebu ipodlezhit regeneracija nakon shema nakon provedeniyaprobopodgotovki: - nakon priprave uzorka DT - uzastopno preskočiti cherezpatron 5 cu. cm etanola, acetona i nakon priprave uzorka benzola-- AZ - uzastopno preskočiti cherezpatron 5 cu. cm acetona i benzola.5.3.5. Koncentrirajući Diapak SSnyat uložak s uloškom C Diapak čepovi proći kroz njega uz pomoć 5 cc štrcaljke. vidi benzen i brtvljenje oba kraja kako patrona.Podgotovlenny uložak može biti pohranjena u techeniesutok na temperaturi ne višoj od 25 ° C. C.Kontsentriruyuschy uložak Diapak C jednokratnu iregeneratsii ne podlezhit.5.4. Vađenje mikotoksinov5.4.1. Zrna i zernoprodukty25 g mljevenog uzorka prenese u koničnu tikvicu i zalit125 kocke. Pogledajte ekstrakciju. Provesti intenzivno peremeshivaniesoderzhimogo tikvicu tijekom 30 min. Ekstrakt filtar filtar cherezbumazhny "plava vrpca".5.4.2. Orasi i uljarica kultur25 g samljeven uzorak prebačen u Erlenmeyerovu tikvicu dobavit125 kocke. Pogledajte ekstrakciju i 40 kubičnih metara. vidi heksan. Izvođenje intensivnoeperemeshivanie tikvicu sadržaj 30 minuta. Posleperemeshivaniya dodati ekstrakt 1 g natrijevog klorida i prodolzhitperemeshivanie 5 min. Filtrirati kroz filter papir"plava vrpca", Filtrirani ekstrakt je prebačen u otopinu i nakon delitelnuyuvoronku snopa prikupiti -atsetonitrilny donji vodeni sloj. Ekstrakt acetonitril odmastiti 25 cc iz heksana u lijevku za odijeljivanje sa kapacitetom od 250 kubnih metara. sm.Ekstrakt prenese u lijevak za odvajanje, doda 25 cc iz heptana te se miješa snažno. Nakon odvajanja sobratnizhny vodi - acetonitril ekstrakt.5.4.3. Ulje rastitelnoe25 g ulja prenese u Erlenmeyerovu tikvicu, doda se 40 cc. smgeksana i 125 kubičnih metara. Pogledajte ekstrakciju. Izvođenje intensivnoeperemeshivanie tikvicu sadržaj 30 minuta. Posleperemeshivaniya da ekstrakt 0,2 g NaCl iprodolzhit miješanja 3 - 5 min. Ekstrakt je prebačen u lijevak i nakon vdelitelnuyu demixing prikupiti donji sloj vode i acetonitrila. Ekstrakt acetonitril odmastiti 25kub. vidi heksan ili heptan ili petroleter delitelnoyvoronke kapaciteta 250 cu. sm.Ekstrakt prenese u lijevak za odvajanje, doda 25 cc iz heptana te se miješa snažno. Nakon odvajanja sobratnizhny vodi - acetonitril ekstrakt.5.5. Pročišćavanje i koncentracija prob5.5.1. Pročišćavanje i koncentriranje uzorka u opredeleniiaflatoksina B1 i zearalenona5.5.1.1. Preliminarna pročišćavanje i koncentriranje proby25 kocka. odmašćeni ekstrakti cm propušten kroz patronDiapak A-3, pri brzini od 2 - 3 kapi sekundi i 20 cc odabrati elyuata.Poluchenny eluat volumena 20 kubičnih metara. vidi razrijediti jednakom obemomvody. Dobivena otopina se pusti kroz umetak za Diapak soskorostyu P-3 1 - 2 kapi sekundi, zatim se uložak je ispran 5 cc vode i očisti s zrakom kroz 1 min.Tselevuyu fraktsiyuelyuirovatspatronaDiapakP 3posledovatelno 7-kocke. acetonitrila i 7 cm kocka. 33 cm protsentnogobenzola acetonitril - brzinom od 1 - 2 kapi sekundu.Sobranny eluata se propusti kroz sloj bezvodnog natrijevog sulfata (10 g) slobodnim padom. Tikvica je isprana s 2 cc. 33 cm protsentnogobenzola u acetonitrilu, a sadržaj prenesen na isti sloybezvodnogo natrijevog sulfata. Opere natrij sulfata 3 cu. sm33 posto benzen u acetonitrilu. Osušena uparitdosuha Filtrat na rotacijskom isparivaču pri temperaturi ne većoj od 40 grad.C i odmah se pripravlja u 0.5 cc. Pogledajte benzola.5.5.1.2. Konačno pročišćavanje na patroni Diapak H (varijanta 1) benzen Otopina je stavljena na patrone s predvaritelnokonditsionirovanny Diapak N. tikvicu koja sadrži suhoyostatok, ispere još 2 puta s 0,5 cu. vidi benzena i uzastopno nanosi rješenja na kalem Diapak N. Sve ispiranja spatrona otbrosit.Zearalenon eluirani iz spremnika Diapak H 4 kocke. cm2 posto octene kiseline u benzenu, te otpari do suhog (doischeznoveniya miris octene kiseline) u rotacijskom temperature isparitelepri ne veći od 50 stupnjeva. C (uzorak H). Suho ostatoknemedlenno rekonstituirati u otapalu sootvetstvuyuschemkonechnomu kromatografije eluira opredeleniyu.Zatem aflatoksina B1 5 cc. 20 cm u protsentnogoatsetonitrila benzena uloška, ​​te upari do suha u struji dušika pritemperature ne više od 40 stupnjeva. C (uzorak A). Krutine nemedlennopererastvoritvrastvoritele odgovarajući konechnomuhromatograficheskomu opredeleniyu.Ekvivalent težinu uzorka uzetog za analizu aflatoksina B1, MNR, - 4 g.Ekvivalent težine uzorka uzetog za analizu zearalenon MNR, - 4g.5.5.1.3. Konačno pročišćavanje na patroni Diapak C (varijanta 2) namijenjena za kukuruz i proizvoda nee.Benzolny otopina je primijenjena na spremnik za predvaritelnokonditsionirovanny Diapak S. tikvicu koja sadrži suhoyostatok, ispere još 2 puta s 0,5 cu. odnose se na benzen i nanestirastvory Diapak uloška C kada je gornja razina prethodnih dijelova otopine filtrapatrona. Sve prana patronaotbrosit.Zearalenon Diapak eluira iz spremnika sa 6 kubnih metara. sm10 posto etil acetata u benzenu i upari do suha (doischeznoveniya miris benzen) na rotacijskom isparivaču pritemperature ne višoj od 50 °. C (uzorak H). Krutine nemedlennopererastvoritvrastvoritele odgovarajući konechnomuhromatograficheskomu opredeleniyu.Zatem Diapak preko spremnika C 3 cc dosljedno nedostaje 5 posto octene kiseline u benzenu i 4 cc. sm25 posto heksana u zraku. Svi eluata se odbacuju. AflatoksinV1 eluiran sa 6 patrona cu. cm 10 posto aceton vdihlormetane. Eluat je uparen do suhog pod strujom dušika na temperaturi od 40 ° C nevyshe. C (uzorak A). Krutina se odmah pererastvoritv otapalo prikladno kraj hromatograficheskomuopredeleniyu.Ekvivalent masu uzorku uzetom na analizu aflatoksina B1, MNR, - 4 g.Ekvivalent težinu uzorka uzetog za analizu zearalenon MNR, - 4g.5.5.2. Pročišćavanje i koncentriranje uzorka u opredeleniidezoksinivalenola i T-2 toksina5.5.2.1. Prethodno čišćenje i koncentracija proby20 kocka. vidi ekstrakt proći kroz patronu Diapak AU-3 soskorostyu 2 - 3 kapi sekundi. Eluat prikupljen. Ispiranje uloška 5kub. cm ekstrakciju i filtrirati kombiniranih eluata vserdtsevidnuyu tikvici isprana 2 filter kocku. cm acetonitrila sobirayapromyvochnuyu tekućine u tikvicu. Rotatsionnomisparitele upari do suha pri temperaturi od približno 60 - 70 stupnjeva,. C. Uparivaniepovtorit 2 - 3 puta s dodatkom za Posuda 3 - 5 cc. smpropanola 2 ili acetonitril do nestanka vode kapljice Nastenko tikvicu (uzorak DT) .5.5.2.2. Završno čišćenje na spremnika Diapak NProbu DT otopljen u 0.5 cc. cm kloroforma i primjenjuje napredvaritelno uređaj uložak Diapak N. obmytesche tikvica sa 2 puta po 0.5 cu. cm nanestirastvory kloroforma i uzastopno na istom trupac polazeći sakupljanje frakcije koje sadrže T 2toksin u odvajanje tikvici. Potpuno ispiranje T-2 toksina 2 cc kloroforma u tikvicu. Eluat se ispari do suhog na rotatsionnomisparitele pri 40 - 45 ° C. C i rekonstituirani vrastvoritele odgovarajući kraj hromatograficheskomuopredeleniyu T-2 toksina (Primjer T) .Dezoksinivalenol eluira iz spremnika u drugi preljev kolbu6 kocku. vidi 20 posto acetona u kloroformu. Uparitdosuha eluata na rotacijskom isparivaču, na temperaturi od 40 - 45 ° C. Ipererastvorit C u otapalu sootvetstvuyuschemkonechnomuhromatograficheskomu određivanje deoksinivalenon (Uzorak D) .Ekvivalent težine uzorka uzetog za analizu deoksinivalenola, MNR, - 4 g.Ekvivalent težina uzorka uzeti za analizu T-2 toksina, MNR, - 4g.6. Aflatoksin M16.1. Opreme, potrošni materijal, reagensi + -------------------------------------------- - + + ----------------- | IR rotacijski uređaj za isparavanje ili jedinica 1m2 | || TU 25-1173.102-84 ispariti uzorke dušika na grijanje | ili drugi . || SRI oko 40 stupnjeva. C | || TSLN Centrifuga tipa 2 ili slično | || W 5-375-4171-73 Uređaj za stvaranje vakuuma od oko -0.7 mm | || Hg. (Voda-mlazna pumpa, ulje vakuum | || pumpa, medicinskih naprava za usisavanje) | || vakuum uređaja za pripremu uzorka (Ba | || razvodnika vakuum), uz ispitivanje prijemnici vmesti- | || most nije manja od 10 kubičnih metara. vidi | || Koncentriranje uložak Diapak S16M, | TU 4215-002 - || poduzeću "BioKhimMak CT"| 05451931-94 || Koncentriranje uložak Diapak C | TU 4215-002 - || poduzeću "BioKhimMak CT"| 05451931-94 || Medicinska kliješta, 15 cm | || Štrcaljka kapaciteta 10 ili 20 kubičnih metara. Pogledajte Luer | || ravnog dna konične tikvice sa čepovima, | || GOST 25.336 s kapacitetom od 50 kubnih metara. vidi | || ostrodonnye Tikvice sa čepovima, sa izmjenjivim | || GOST 25.336 izravnim stošca 14/23 s kapacitetom od 10 ili 25 kubičnih metara. | || See | || kruškolikih Tikvice sa čepovima, sa izmjenjivim | || GOST 25.336 izravnim stošca 14/23 s kapacitetom od 25 kubnih metara. vidi | || mjerni valjci s kapacitetom od 50 kubnih metara. Vidi, | GOST 1770 || 2 stanice ili epruveta diplomirao vmestimos-. | || TEW 15 ili 20 kubičnih metara. vidi | || microsyringe kapaciteta 100 kubnih metara. mm ili pipet- | || GOST 20.292 Ka završio izvršenje 4 ili 5, klasa 1 | || točnost kapaciteta 1 cu. vidi | || Nesterilizirana medicinske pamuk, s / b | || acetonitril za tekućinsku kromatografiju, | W 6-09-14 - || OP-3, FSR, otkloniti ili | || 2167-84 acetonitril, 1 stupanj kooperativni "Kriohrom", | || r. Saint - Petersburg | || aceton, FSR, OP-2, otkloniti | || TU 6-09-3513-75 heptan, heksan, xv ili petroleter (mar- | || TU 6-09-3375-78 ki 70-100) , otkloniti | || limunska kiselina, 1-voda, p.a. | || GOST 3652-29 natrijev klorid, reagent grade | || GOST 4233-66 kloroform medicinske, održati tijekom CaClz | || 2 | || otkloniti | || natrijev sulfat, bezvodni, reagencijski stupanj | || GOST 4166-76 destilirana voda | | + ---------------------------------------------- + - ---------------- + 20% acetona u kloroformu - 20 cu. aceton dobavithloroform cm do 100 cu. se odnose na ukupnu ili 5% metanol vhloroforme - 20 cu. dodati 5 cm kloroform kocke. cm metanola, a otopina sa kloroformom da bi se 100 cu. sm.6.2. Metoda priprave M1 probAflatoksin ukloni iz tekućeg uzorka mlijeka kroz propuskaniemee spremnika Diapak S16M. Frakcija koja sadrži aflatoksinM1, ispere s kloroformom i patrone, nakon sušenja iuparivaniya, konačno pročišćavanje se izvodi na spremnika Diapak S.Podgotovlennaya uzorak spreman za kromatografsko analizu.Aflatoksin M1 iz vrhnja i mliječnih napitaka ekstragiruyuthloroformom u nazočnosti natrij klorida i limunske kiseline uskladile s MU N 4082-86 <*> и, после высушивания и упаривания,проводят окончательную очистку на патроне Диапак С.--------------------------------<*> Методические указания по обнаружению, идентификации иопределению содержания афлатоксинов в продовольственном сырье ипищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостнойхроматографии. Утв. МЗ СССР 20.03.86 N 4082-86.Для проверки правильности проведения пробоподготовки иуточнения степени извлечения микотоксинов проводят анализ методомстандартной добавки в исходный экстракт.Время проведения пробоподготовки - 60 мин. Степень извлечения<*> - 80%. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10%.--------------------------------<*> При снижении степени извлечения афлатоксина М1 см.Приложение 1.6.3. Подготовка концентрирующих патронов6.3.1. Концентрирующий патрон Диапак С16МСнять с патрона Диапак С16М заглушки и пропустить через него спомощью шприца последовательно по 5 куб. см ацетонитрила и воды.Заглушить оба конца патрона. Подготовленный таким образом патронможет храниться в течение суток при температуре не выше 25 град.C.Концентрирующий патрон Диапак С16М одноразового применения ирегенерации не подлежит.6.3.2. Концентрирующий патрон Диапак ССнять с патрона Диапак С заглушки и пропустить через него спомощью шприца 5 куб. см бензола и заглушить оба конца патрона.Подготовленный таким образом патрон может храниться в течениесуток при температуре не выше 25 град. C.Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения ирегенерации не подлежит.6.4. Подготовка проб молочных продуктов к анализу6.4.1. Подготовка, концентрирование и очисткапроб молокаПробу молока 50 куб. см центрифугировать на подходящемоборудовании в течение 5 мин. при 1000 об./мин. Для определенияафлатоксина М1 отобрать 20 куб. см супернатанта, избегая попаданияжира.Сухое молоко растворяется в соответствии с инструкцией илисоответствующим ТУ и обрабатывается, как описано выше.20 куб. см подогретой до 40 град. C подготовленной пробымолока пропустить через предварительно подготовленный патронДиапак С16М со скоростью 3 капли в секунду. Затем патрон промыть 5куб. см дистиллированной воды и высушить продуванием воздуха втечение 1 мин. Элюаты отбросить. Патрон промыть 10 куб. см гексанаи вновь высушить воздухом в течение 1 мин.Афлатоксин М1 элюировать 6 куб. см хлороформа. Собранный элюатпропустить самотеком через слой безводного сульфата натрия (3 куб.см). Колбу обмыть 1 куб. см хлороформа, и содержимое перенести натот же слой безводного сульфата натрия. Хлороформные растворысобрать (Экстракт М).6.4.2. Подготовка проб сметаны и кисломолочныхпродуктовВ коническую колбу вместимостью 250 куб. см помещают навеску20,0 г сметаны или 40 куб. см кисломолочного напитка. Затем тудаже вносят 10,0 куб. см водного раствора 2 г хлорида натрия и 0,24г лимонной кислоты и 100 куб. см хлороформа (все составные частипредварительно подогревают до температуры 35 - 38 град. C).Содержимое колбы встряхивают 2 - 3 мин., переносят в центрифужныестаканы и центрифугируют 15 мин. при 3000 - 4000 об./мин. Отделяютнижний хлороформный слой, высушивают над 10 г безводного сульфатанатрия, отфильтровывают, измеряют объем фильтрата (V ) и упариваютфдо 5 - 6 куб. см (Экстракт М).6.5. Окончательная очистка пробыЭкстракт М нанести на патрон Диапак С со скоростью 3 - 4 каплив секунду. Промыть сульфат натрия 1 куб. см хлороформа, и растворнанести на патрон Диапак С при достижении верхнего фильтра патронауровнем предыдущей порции раствора.Афлатоксин М1 элюировать с патрона 10 куб. см 20-процентногоацетона в хлороформе или 7 куб. см 5-процентного метанола вхлороформе. Элюат собрать и упарить досуха на ротационномиспарителе или в слабом токе азота при температуре не выше 40град. C. Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе,соответствующем конечному хроматографическому определению (ПробаМ).Эквивалент массы пробы молока, взятой на анализ афлатоксинаМ1, М , - 20 г.прЭквивалент массы пробы сухого молока рассчитывается поформуле:mМ = --- x 20, (6.1)прVгде:М - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прm - масса пробы сухого молока, г-V - объем воды для растворения пробы сухого молока, куб. см.Эквивалент массы пробы сметаны или кисломолочных напитков,взятой на анализ, рассчитывается по формуле:VфM = --- x m ,(6.2)пр 100пргде:M - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прV - объем фильтрата, куб. см-фm - масса (объем) пробы сметаны или кисломолочных напитков,прг (куб. см).7. Патулин7.1. Оборудование, материалы, реактивы+----------------------------------------------+-----------------+|Испаритель ротационный ИР-1М2 |ТУ 25-1173.102 - || |84 или др. ||Центрифуга типа ЦЛН-2 или аналогичная |ТУ 5-375-4171-73 ||Устройство для создания вакуума около -0,7 мм | ||рт.ст. (водоструйный насос, масляный вакуумный| ||насос, медицинский отсасыватель) | ||Вакуумное устройство для подготовки проб (ва- | ||куумный манифолд), с приемниками проб вмести- | ||мостью не менее 10 куб. см| ||Устройство для упаривания проб в токе азота | ||при нагревании около 40 град. C (желательно | ||суховоздушная баня) | ||Концентрирующий патрон Диапак П-3,|ТУ 4215-002 -||ЗАО "БиоХимМак СТ"|05451931-94 ||Концентрирующий патрон Диапак С, |ТУ 4215-002 -||ЗАО "БиоХимМак СТ"|05451931-94 ||Пинцет медицинский, 15 см | ||Колбы плоскодонные конические с пробками вмес-|ГОСТ 25336 ||тимостью 50 куб. см | ||Колбы остродонные с пробками с взаимозаменяе- |ГОСТ 25336 ||мым конусом 14/23 вместимостью 5, 10 или 25 | ||куб. см | ||Колбы грушевидные с пробками с взаимозаменяе- |ГОСТ 25336 ||мым конусом 14/23 вместимостью 25 куб. см | ||Пробирка градуированная вместимостью 15 или 20|ГОСТ 1770||куб. см | ||Цилиндры мерные вместимостью 10 и 50 куб. см, |ГОСТ 1770||2 кл. | ||Микрошприц вместимостью 100 куб. мм (или пи- |ГОСТ 20292 ||петка с делениями исполнения 4 или 5, 1-го| ||класса точности вместимостью 1 куб. см) | ||Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ | ||Вата медицинская нестерилизованная, х/б | ||Ацетат цинка 2-водный, чда|ГОСТ 5823||Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, |ТУ 6-09-14 - ||ОП-3 осч, ректифицированный |2167-84 ||Ацетон, осч, ректифицированный, ОП-2 |ТУ 6-09-3513-75 ||Бензол, хч, ректифицированный |ГОСТ 5955-75 ||Гексацианоферат II калия (калий железистосине-|ГОСТ 4207||родистый) 3-водный, хч| ||Гептан, гексан, хч или петролейный эфир |ТУ 6-09-3375-78 ||(фракция 70-100), хч, ректифицированный | ||Хлороформ, медицинский, выдержанный над CaCl ,| ||2 | ||ректифицированный | ||Этилацетат (этиловый эфир уксусной кислоты), |ГОСТ 22300-76||хч, выдержанный над Na CO и ректифицированный| || 2 3| ||Карбонат натрия, хч |ГОСТ 83-79 ||Сульфат натрия, безводный, хч |ГОСТ 4166-76 ||Вода бидистиллированная | |+----------------------------------------------+-----------------+1,5% карбоната натрия - 1,5 г карбоната натрия растворить в100 куб. см воды.15% этилацетата в бензоле - 15 куб. см этилацетата разбавитьбензолом до 100 куб. см.30% этилацетата в бензоле - 30 куб. см этилацетата разбавитьбензолом до 100 куб. см.Раствор Карреза I - 15,0 г гексацианоферата II калиярастворить в 100 куб. см воды.Раствор Карреза II - 30,0 г ацетата цинка растворить в 100куб. см воды.7.2. Способ подготовки пробМикотоксин патулин извлекают из проб осветленных соков инапитков пропусканием их через патрон Диапак П-3. Затем патулинэлюируют этилацетатом с патрона и после обработки растворомNa CO , высушивания, упаривания и перерастворения проводят2 3окончательную очистку на патроне Диапак С.Соки и напитки с мякотью и консистентные продукты разводятводой, осветляют растворами Карреза в соответствии с ГОСТом28038-89 <*>, фильтруют и экстрагируют патулин пропусканиемфильтрата через патрон Диапак П-3. Затем патулин элюируютэтилацетатом с патрона и после обработки раствором Na CO ,2 3высушивания, упаривания и перерастворения проводят окончательнуюочистку на патроне Диапак С.--------------------------------<*> Продукты переработки плодов и овощей. Метод определениямикотоксина патулина. ГОСТ 28038-89.Подготовленные пробы готовы к хроматографическому анализу.Для проверки правильности проведения пробоподготовки иуточнения степени извлечения патулина проводят анализ методомстандартной добавки в пробу.Время проведения пробоподготовки - 90 мин. Степень извлечения<*> - 60%. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10%.--------------------------------<*> При снижении степени извлечения патулина см. Приложение 1.7.3. Подготовка концентрирующих патронов7.3.1. Концентрирующий патрон Диапак П-3Установить патрон Диапак П-3 вертикально в подходящееустройство для вакуумирования и открыть верхнюю крышку.Суспендировать сорбент при перемешивании стеклянной палочкой в 10куб. см бензола, дать отстояться сорбенту и пропустить при слабомвакууме, не допуская попадания воздуха, последовательно по 10 куб.см бензола и ацетона.Сохранив слой ацетона около 2 см, ввести пористый полимерныйфильтр (имеется в комплекте) и уплотнить его палочкой по верхнемуслоюсорбента.Затемпропустить оставшийся ацетон ипоследовательно по 10 куб. см экстрагента (см. п. 5.1) и смесиэкстрагент - вода (1:1), не допуская попадания воздуха на сорбентсо скоростью 2 - 3 капли в секунду.Сохранив слой последнего элюента около 2 см, отключить вакууми заглушить патрон сначала верхней крышкой, а затем (послепрекращения скапывания) и нижней заглушкой. Подготовленный такимобразом патрон может храниться в течение рабочего дня, а прислучайном пересыхании приводится в рабочее состояние прокачиванием10 куб. см смеси экстрагент - вода (1:1).Перед проведением пробоподготовки через патрон Диапак П-3пропустить 10 куб. см воды.Концентрирующий патрон Диапак П-3 многоразового применения иподлежит регенерации после проведения пробоподготовки по схеме егоподготовки, как указано выше.7.3.2. Концентрирующий патрон Диапак ССнять с патрона Диапак С заглушки и пропустить через него спомощью шприца 5 куб. см бензола и заглушить оба конца патрона.Подготовленный таким образом патрон может храниться в течениесуток при температуре не выше 25 град. C.Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения ирегенерации не подлежит.7.4. Подготовка проб к анализу7.4.1. Подготовка осветленных соков и напитковОтфильтровать пробу через плотный бумажный фильтр до получения20 куб. см фильтрата (Фильтрат П).7.4.2. Подготовка соков и напитков с мякотьюи консистентных продуктовНавеску пробы массой 10,0 г поместить в стеклянный стакан,смешать с небольшим количеством дистиллированной воды иколичественно перенести в мерную колбу вместимостью 50 куб. см. Вмерную колбу внести 6,0 куб. см раствора Карреза I и 6,0 куб. смраствора Карреза II. Содержание колбы довести дистиллированнойводой до метки, тщательно перемешать и отфильтровать в мерныйцилиндр через бумажный складчатый фильтр. Измерить объем фильтрата(Фильтрат П).7.5. Концентрирование и очистка пробы7.5.1. Концентрирование пробы на патроне Диапак П-3Весь объемФильтратаПнанестина предварительнокондиционированный патрон Диапак П-3 со скоростью 1 - 2 капли всекунду. Промыть патрон 5 куб. см бидистиллированной воды. Всесмывы отбросить.Патулин элюировать с патрона 10 куб. см этилацетата в колбуили мерную пробирку с пришлифованной пробкой, содержащую 5 куб. см1,5-процентного карбоната натрия, закрыть пробкой, интенсивноперемешать и дать отстояться. Декантировать верхний этилацетатныйслой, высушить его безводным сульфатом натрия (3 г) и перенести вколбу для упаривания. В колбу или пробирку, содержащую оставшийся1,5-процентный карбонат натрия, добавить еще 10 куб. смэтилацетата, перемешать и, после полного расслоения, высушиванияэтилацетатного слоя тем же сульфатом натрия, объединить его спервой порцией этилацетатного раствора в той же колбе дляупаривания. Операцию повторить с 5 куб. см этилацетата.Упарить этилацетатный раствор на ротационном испарителе притемпературе не выше 40 град. C до объема около 0,5 куб. см (неупаривать досуха!). Количественно перенести пробу в сердцевиднуюколбу вместимостью не более 5 куб. см или в полимерную пробиркутипа Эппендорф, промыв предыдущую отгонную колбу 0,5 куб. смэтилацетата, и присоединить к упариваемой пробе. Пробу упарить втоке азота при температуре не более 40 град. C в суховоздушнойбане до 0,5 куб. см и добавить к ней 2,5 куб. см бензола.7.5.2. Окончательная очистка пробы на патроне Диапак СБензол - этилацетатный раствор пропустить через патрон ДиапакC со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Обмыть колбу еще 0,5 - 1,0куб. см 15-процентного этилацетата в бензоле и нанести на патрон.Все смывы отбросить.Патулин элюировать с патрона 6 куб. см 30-процентногоэтилацетата а бензоле, собирая элюат в сердцевидную отгоннуюколбу. Элюат упарить досуха в токе азота при температуре не выше40 град. C в суховоздушной бане.Внимание! После упаривания пробу немедленно перерастворить в100 мкл хлороформа, охлажденного до 0 - 5 град. C (для ТСХ -анализа) или в 100 - 500 мкл охлажденной до 5 - 8 град. Cбидистиллированной воды, подкисленной до pH 4,0 уксусной кислотой(для ВЭЖХ - анализа) и быстро охладить до 0 - 5 град. C (Проба П).Хранить Пробу П в холодильнике не более 1 ч.Эквивалент массы пробы осветленных соков и напитков, взятой наанализ, М , - 20 г, соков и напитков с мякотью и консистентныхпрпродуктов определяется по формуле:VФр.ПМ = ----- x m , (7.1)пр 50 пргде:М - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прV - объем Фракции П, куб. см-Фр.Пm - масса пробы соков и напитков с мякотью или консистентныхпрпродуктов, г.Приложение 1РЕКОМЕНДУЕМАЯ МЕТОДИКАИСПЫТАНИЙ КОНЦЕНТРИРУЮЩИХ ПАТРОНОВ ДИАПАКВведениеКаждая партия концентрирующих патронов Диапак П-3, ДиапакС16М, Диапак Н, Диапак С, а также партии сорбентов Диасорб А иДиасорб АУ подвергаются выходному контролю в соответствии сТУ 4215-002-05451931-94 наихсоответствиетребованиям,предъявляемым к специализированным патронам для твердофазнойэкстракции микотоксинов. Этим метрологически обеспечивается ихпроизводство.Применение настоящих испытаний рекомендуется проводить вследующих случаях:- еслирезультатпроверкиправильности проведенияпробоподготовки методом стандартной добавки не соответствуетнормативу коэффициента извлечения-- если патроны Диапак подвергались неправильному хранению илинарушена целостность упаковки-- в случаях дополнительного сверхнормативного использованиярегенерируемых патронов (Диапак Н, Диапак П-3).Приведенные ниже методики проверки патронов Диапак позволяютвыявить ошибку по стадиям пробоподготовки. При соответствиихарактеристик патронов Диапак нормативным требованиям следуетискать ошибки в правильности подготовки растворителей иприготовлениирастворов,контроле условий упаривания иперерастворения анализируемых проб.Если среди стадий подготовки пробы присутствует подготовка напатроне Диапак С, рекомендуется начинать анализ возможной потерицелевого компонента именно с этого патрона. Это связано счувствительностьюсиликагеляк качеству используемыхрастворителей, и прежде всего с содержанием в них воды. Такаяспецифика сильной зависимости активности патрона Диапак С отусловий его хранения и качества используемых растворителей можетпотребовать оптимизации количества элюента, используемого приработе с этими патронами в конкретной лаборатории.Общая частьНастоящая Методикапредназначенадляметрологическогообеспечения применения патронов Диапак в анализе микотоксинов иустанавливает процедуру их испытаний. Критерием качества патроновДиапак является соответствие результатов испытаний нормативамкоэффициента извлечения, K , в модельных экспериментах вRсоответствии со схемами элюирования, приведенными в разделах 5 - 7настоящих Методических указаний.Коэффициент извлечения рассчитывают по формуле:C` x KdK = ------- x 100, (1)R Cгргде:K - коэффициент извлечения данных микотоксинов, %-RC` - концентрация данного микотоксина, найденная в результатеиспытания, мкг/куб. см (или S` площадь хроматографического пика,соответствующая концентрации C`)-C - концентрация того же микотоксина, используемая длягрградуировки хроматографической системы, мкг/см (или Sплощадьгрхроматографического пика, соответствующая концентрации C )-грK - коэффициент разведения образца.dЗа окончательное значение K принимаетсясреднееRарифметическое результатов двух параллельных испытаний, еслиабсолютное расхождение между ними не превышает 5%.Испытания проводятся относительным методом по схеме "введено -найдено", поэтому специальных требований к стандартным образцаммикотоксинов не предъявляется.1. Испытание патронов Диапак А-3 иДиапак П-3 по афлатоксину В1 и зеараленонуИспытание патронов Диапак А-3 проводится совместно с ДиапакП-3 из-за низких концентраций афлатоксина В1 и зеараленона, атакже их температурной лабильности, приводящей к невозможностиконцентрирования упариванием. Патрон Диапак П-3 может быть испытаннезависимо от Диапак А-3, что рекомендуется выполнять потребителючерез каждые 10 проб после соответствующей регенерации по п.5.3.3.Приготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов1,0 куб. см испытательной смеси, содержащей 0,4 мкг афлатоксина В1и 4,0 мкг зеараленона в произвольной смеси бензола и ацетонитрила.Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см перенести в сердцевиднуюколбу, и упарить растворители досуха в токе азота при температуре40 град. C. Немедленно перерастворить остаток в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению. Ориентировочные значения концентраций: 0,4 мкг/куб.см - для афлатоксина В1 и 4,0 мкг/куб. см - для зеараленона.Ввести раствор не менее двух раз в хроматографическую систему ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждогоиз микотоксинов, C (S ).гр грПодготовить патроны Диапак А-3 и Диапак П-3 в соответствии сп. п. 5.3.1 и 5.3.3.Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 25 мл экстрагента (смеси ацетонитрил - вода -84:16) и нанести на патрон Диапак А-3 в соответствии с п. 5.1.1.Полученные 20 мл элюата сконцентрировать на патроне Диапак П-3 всоответствии с п. 5.1.1. Концентратперерастворитьипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту, получивзначение C`(S`).Рассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,25.R dКоэффициент извлечения, K , должен быть не менее 90% - дляRафлатоксина В1 и 85% - для зеараленона.При испытании одного патрона Диапак П-3 вторую аликвотуобъемом 0,25 куб. см после упаривания перерастворить в 40 мл смесиэкстрагент - вода (1:1) (смеси ацетонитрил - вода 42:58) исконцентрировать в соответствии с п. 5.1.1. Рассчитать значениеK , принимая K = 1,00. Коэффициент извлечения, K , должен быть неRd Rменее 95% - для афлатоксина В1 и 95% - зеараленона.2. Испытание патронов Диапак АУ-3по дезоксиниваленолу и Т-2 токсинуПриготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов1,0 см испытательной смеси, содержащей по 20 мкг дезоксиниваленолаи Т-2 токсина в произвольной смеси бензола и ацетонитрила.Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см перенести в сердцевиднуюотгонную колбу и упарить досуха на ротационном испарителе притемпературе 40 - 50 град. C. Перерастворить остаток в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению. Ориентировочное значение концентраций: 20 мкг/куб. см- для дезоксиниваленола и Т-2 токсина. Для градуировкихроматографической системы ввести раствор не менее двух раз ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждогоиз микотоксинов, C (S ).гр грПодготовить патрон Диапак АУ-3 по п. 5.3.2.Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 20 мл экстрагента (смеси ацетонитрил - вода84:16) и нанести на патрон Диапак АУ-3, в соответствии с п. 5.5.2.После упаривания досуха остаток перерастворить и проанализироватьаналогично градуировочному эксперименту, получив значение C` (S`).Рассчитать значение K по формуле 1. Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K должен быть не менее 95% - дляRдезоксиниваленола и Т-2 токсина.3. Испытания патрона Диапак НКонцентрирующие патроны Диапак Н являются универсальнымирегенерируемыми патронами для окончательной очистки афлатоксинаВ1), зеараленона, дезоксиниваленола и Т-2 токсина, поэтомуиспытание рекомендуется выполнять через каждые 10 проб послеочередной регенерации по п. 5.3.4. Патроны Диапак Н обеспечиваюттонкую очистку указанных микотоксинов с высокими метрологическимихарактеристиками (K не менее 90%), поэтому значения K менее 90%R Rчаще всего свидетельствуют об ошибках в приготовлении элюентов илио недостаточной чистоте растворителей.3.1. Испытание по афлатоксину В1 и зеараленонуСухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести поусловиям п. 5.1.2 на подготовленный (см. п. 5.3.4) патрон ДиапакН. После элюирования и упаривания Пробы З и Пробы А немедленноперерастворить их в 0,25 куб. см растворителя, соответствующегоконечному хроматографическому определению, и проанализироватьаналогично градуировочному эксперименту по п. 1, получив значениеC (S ) и C`(S`) по каждому из микотоксинов.гр грРассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K должен быть не менее 90% - дляRафлатоксина В1 и зеараленона.3.2. Испытания по дезоксиниваленолу и Т-2 токсинуСухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 2 перерастворить в 0,5 мл хлороформа и нанести по условиям п.5.1.2 на подготовленный патрон Диапак Н. После элюирования иупаривания Пробу Д и Пробу Т перерастворить в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению, и проанализировать аналогично градуировочномуэксперименту по п. 2, получив значения C (S ) и C`(S`) погр гркаждому из микотоксинов.Рассчитать значения K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения Kдолжен быть не менее 90% дляRдезоксиниваленола и Т-2 токсина.4. Испытания патрона Диапак СКонцентрирующие патроны Диапак С являются одноразовымипатронами для окончательной очистки афлатоксина В1 и зеараленона,а также афлатоксина М1 и патулина. Патроны Диапак С обеспечиваюттонкую очистку указанных микотоксинов с хорошими метрологическимихарактеристиками (K = 75 - 90%). Для достижения указанныхRхарактеристик необходимо установить оптимальный объем элюированиямоделированием порционного элюирования (1 - 3 порции по 3 мл)целевых фракций в ходе настоящих испытаний.Оптимальную схему элюирования, т.е. необходимое число порцийпо 3 мл, потребитель устанавливает по достижению суммарногокоэффициентаизвлечениянениже указанного норматива.Установленный объем элюирования подлежит проверке при смене партиирастворителей и их смесей, используемых для тонкой очисткимикотоксинов.4.1. Испытания по афлатоксину В1 и зеараленонуПодготовить патрон Диапак С в соответствии с п. 5.3.5.Сухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести напатрон Диапак С в соответствии с п. 5.1.3. После элюирования ираздельного упаривания трех фракций Пробы З и трех фракций Пробы Анемедленно перерастворить их в 0,25 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 1,получив по три значения Sи одному S` по каждому изгрмикотоксинов.Рассчитать K по формуле (1) для каждой из трех фракций Проб ЗRи А K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения K должен быть неdRменее 90% - для афлатоксина В1 и 85% - для зеараленона. Определитьминимальновозможноечисло последовательных фракций,обеспечивающее суммарный K не ниже норматива. Найденное числоRфракций (от 1 до 3) и определяет оптимальный объем элюированияданных микотоксинов с патрона Диапак С данной партии сприготовленными растворителями.Если значение суммарного K меньше нормативного значения, тоRэто свидетельствует об ошибках в приготовлении элюирующих смесейи/или о недостаточной чистоте растворителей, в особенности с точкизрения содержания в них воды.4.2. Испытание по афлатоксину М1Приготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 куб. смиспытательной смеси, содержащей 0,1 мкг афлатоксина М1 впроизвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом0,25 куб. см перенести в сердцевидную колбу и упарить раствор втоке азота при температуре 40 град. C. Немедленно перерастворитьостаток в 0,25 - 1,0 куб. см растворителя, соответствующегоконечному хроматографическомуопределению.Ориентировочныезначения концентраций афлатоксина М1 0,025 - 0,1 мкг/куб. смсоответственно. Для проведения градуировочного эксперимента ввестираствор не менее двух раз в хроматографическую систему ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиковафлатоксина М1, C (S ).гр грВторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить, какописано выше, перерастворить в 6 мл хлороформа и нанести вусловиях п. 6.5 на подготовленный (см. п. 6.3.2) патрон Диапак С.После элюирования и раздельного упаривания трех последовательныхфракций Пробы М немедленно перерастворить их в 0,25 - 1,0 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению, и проанализировать аналогично градуировочномуэксперименту, получив три значения C`(S`) по афлатоксину М1.Рассчитать K по формуле (1) для каждой их трех фракций ПробыRМ K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения K для афлатоксинаdRМ1 должен быть не менее 85%. Найти оптимальный объем элюированияафлатоксина М1 с патрона Диапак С по алгоритму, приведенному в п.4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.4.3. Испытание по патулинуПриготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 куб. смиспытательной смеси, содержащей 4,0 мкг патулина в произвольнойсмеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. смперенести в сердцевидную колбу и упарить растворитель в токе азотапри температуре 35 - 40 град. C. Немедленно перерастворить остатокв 0,25 куб. см растворителя, соответствующего конечномухроматографическомуопределению.Ориентировочноезначениеконцентрации патулина: 4,0 мкг/куб. см. Для проведенияградуировочного эксперимента ввести раствор не менее двух раз вхроматографическую систему и рассчитать среднее арифметическоезначение площади пика патулина, C (S ).гр грВторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 3 мл 15-процентного этилацетата в бензоле инанести в условиях п. 7.5.2 на подготовленный (см. п. 7.3.2)патрон Диапак С. После элюирования и раздельного упаривания трехпоследовательных фракций Пробы П немедленно перерастворить их в0,25 куб. смрастворителя,соответствующегоконечномухроматографическому определению, и проанализировать аналогичноградуировочному эксперименту по п. 4.3, получив три значенияC`(S`) по патулину.Рассчитать значение K по формуле (1) для каждой из трехRфракций Пробы П. K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения KdRдля патулина должен быть не менее 75%. Найти оптимальный объемэлюирования патулина с патрона Диапак С по алгоритму, приведенномув п. 4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.5. Испытание патрона Диапак П-3 по патулинуВторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.3 объемом 0,25куб. см после упаривания перерастворить в охлажденной до 5 - 8град. C воде, подкисленной уксусной кислотой до pH 4,0, исконцентрировать в условиях п. 7.5.1 на подготовленном (см. п.7.3.1) патроне Диапак П-3. После элюирования и высушивания упаритьэтилацетатный экстракт досуха в токе азота при температуре 35 - 40град. C, немедленно перерастворить в 0,25 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п.4.3, получив значения C (S ) и C`(S`).гр грРассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K для патулина должен быть не менее 80%.R6. Испытание патрона Диапак С16М по афлатоксину М1Вторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.2 объемом 0,25куб. см после упаривания перерастворить в 20 мл 5-процентногоацетонитрила в воде и нанести в соответствии с п. 6.4.1 наподготовленный по п. 6.3.1 патрон Диапак С16М. После элюирования ивысушивания упарить хлороформный экстракт М на ротационномиспарителе при температуре не выше 40 град. C, немедленноперерастворить его в 0,25 - 1,0 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п.4.2, получив значения C (S ) и C`(S`) для афлатоксина М1.гр грРассчитать K по формуле (1) K = 1,00. Коэффициент извлечения,R dK , по афлатоксину М1 должен быть не менее 95%.
zdravstveno zakonodavstvo

Moskva, Savezni centar za sanitarnu inspekciju Ministarstva zdravstva Rusije, 1999UtverzhdayuGlavny gosudarstvennyysanitarny vrachRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO23 listopada 1999 godaData uvod u siječnju 2000 goda4.1 -1. Metode kontrole. KEMIJSKA FAKTORYOPREDELENIE MASS KONTSENTRATSIIMIKOTOKSINOV prehrambenih sirovina i PRODUKTAHPITANIYA. Priprema uzorka METODOMTVERDOFAZNOY EKSTRAKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMUK 4.1.787-991. Razvijen od strane Federalnog centra za državne sanitarne i epidemiološke MinzdravaRossii (VB Skachkov, IV Bragin, kraljica NV) i CJSC"BioKhimMak CT" (Vodeći istraživač Vasiyarov GG, GS starshiynauchny zaposlenik Aleksejev, viši istraživač OsokinD.M., Doktor kemijskih znanosti Staroverov SM.). 2. Odobreno i staviti na snagu glavni gosudarstvennymsanitarnym liječnik Ruske Federacije od 23. listopada 1999. godine D.3. Vpervye.1 upoznao. Svrha i područje primeneniyaNastoyaschie Metodicheskieukazaniyaustanavlivayutsposobypodgotovki uzoraka prehrambenih sirovina i hrane produktovmetodom čvrste faze ekstrakcije posleduyuschegohromatograficheskogo za mikotoksina analize i sigurnosnih studija dlyaprovedeniyalaboratornyh pischevoyproduktsii gossanepidsluzhby institucije Ruske Federacije, kao i dlyapredpriyaty i institucije koje se bave kontrola kvalitete iissledovaniya prehrambenih sirovina i prehrambenih proizvoda za dosljednost s SanPiN 2.3.2.560-96 "Kkachestvu higijenski zahtjevi i sigurnost prehrambenih sirovina i pischevyhproduktov" i akreditirani u skladu s utvrđenim poryadke.2. Metoda za pripremu uzoraka probPodgotovka obuhvaća sljedeće dijelove: - vađenje test objekt pruža ekstrakt poluchenieedinogo sadrži sve mikotoksina normalizirane vdannom predmet SanPin 2.3.2.560-96-- ekstrakta pripremu uzorka pomoću krute faze ekstrakcije, vklyuchayuschayapredvaritelnuyuochistku kontsentrirovanieiokonchatelnuyu pročišćavanja uz koncentraciju uloške Diapak.3 , Zahtjevi bezopasnostiPri Reagensi i otapala i veschestvamineobhodimo skladu sa sigurnosnim zahtjevima koje dlyaraboty otrovni, korozivne tvari i zapaljive POGOST 12.1.005-88.4. Uvjeti priprave probProtsessy obavlja priprema i obradu uzoraka otopine provodi vnormalnyh uvjetima pri temperaturi okoline od 18 - 22grad. C.5. Aflatoksin B1 (AP-B1), zearalenon (Zon), deoksinivalenon (DON) i T-2 toksin (T-2), 5.1. Oprema, materijali, reaktivyTablitsa 1 + ------------------------------------ + ------ --- + --------- + --- + --- + | Oprema, materijali, reagensi | AT-B1 | Zon | DON | 2 || T i rješenja + ---- + ---- + ---- + ---- + | ||| 1 | 2 | 1 | 2 | | ||| var. | Var. | Var. | Var. | | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | uzorci tipa vibracijski | + || AVU-6C TU 64-1-2451-78 ili magnetska | || -magnetic ili mehaničkom miješalicom | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | analitička vaga s točnošću od | || + težio 0,01 g +/- | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | tipa Mill "ciklon" QC-114 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | rotacijski uređaj za isparavanje (TS-1m2, | || + W ili 25-1173.102-84 al.) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | uređaj za vakuum | || + o -0.7 mm Hg (Vodenim mlazom | || pumpe, vakuumske pumpe ulja, | || Medicinska sisaljka) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | vakuumski uređaj za trening | || + uzorci (vakuum cijev s više otvora, s) prijemnika | || nadimci suđenje kapacitet manji od | || 10 cu. vidi | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | uređaj za isparavanje uzoraka | + | + | - | - | - | - || struja dušika uz zagrijavanje oko ||||| | || 40 stupnjeva. C (suhi zrak je poželjno ||||| | || kupka) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uložak Diapak A-3, | + | + | + | + | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uloška Diapak AU-3, | - | - | - | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uloška Diapak P-3, | + | + | + | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uložak Diapak H, | + | - | + | - | + | + || TU 4215-002-05451931-94, ZAO ||||| | ||"BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | Koncentriranje uložak Diapak C, | - | + | - | + | - | - || TU 4215-002-05451931-94, ||||| | tvrtka || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | medicinske kliješta, 15 cm | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | metal lopaticom ili porculan | + || žlica | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | ravnog dna posude s koničnim | + | + | + | + | - | - || čepovi s kapacitetom od 50 kubičnih metara. cm ||||| | || GOST 25.336 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | ravnim dnom konične tikvice | + || (Erlenmeyerovu) zagušenja vmestimos- | || TEW 250 ili 300 cc. cm | || GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Buchner tikvica kapaciteta 500 kubnih metara. | + || See | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | dimnjak kapacitet Bunsen | || + 200 cu. vidi | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | toka kapacitet za odvajanje | || + 250 cu. vidi GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ostrodonnye boce s čepovima na | + || GOST 25336 s izmjenjivih konu- | || som 14/23 kapacitet 5, 10 | || 25 cu. vidi | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kruške u obliku boce s čepovima na | + | + | + | + | - | - || GOST 25.336 s izmjenjivim konu- ||||| | || som 14/23 kapacitet od 10 i 25 kubičnih metara. ||||| | || vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | mjerni valjci s kapacitetom od 25, 50, | || + 100 cu. cm 2 stanice, prema GOST 1770 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | microsyringe s kapacitetom od 100 kubnih metara. mm | || + (ili pipete završio GOST | || 20.292 izvođenje 4 ili 5, 1. razvrstavanju |. || sa točnost kapacitet 1 cc) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | filtar papir (gusti, uski || - || - | + | + || koporistaya polako filtriranje ||||| | | | tipa sedimenta tanka "plava ||||| | || Feed") ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | Nesterilizirana medicinska pamuk, | || + x / b | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | acetonitril tekućinskom kromatografijom | + || grafija, OP-3 FSR TU | || 6-09-14-2167-84, otkloniti | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | aceton, visoke čistoće, prema TU 6-09-3513-75 | - | + | - | - | - | - || OP-2, otkloniti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | benzen, stupnja čistoće reagensa, prema GOST 5955-75, vyder- | + | + | + | + | - | - || zhanny preko Na SO, otkloniti ||||| | || 2. travnja ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | heptan, heksan, XQ, TU | + | + | + | + | - | - || 6-09-3375-78 ili petroleter ||||| | || (frakcija: 70 - 100), stupnja čistoće reagensa, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 2-propanol (izopropanol), | - | - | - | - | + | + || XQ, TU 6-09-402-75, ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | ledena octena kiselina, xv u | + | + | + | + | - | - || GOST 61-75 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | kloroform, medicinske, kontinuirana | - | - | - | - | + | + || preko CaClz, otkloniti ||||| | || 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | metilen klorid (diklormetan), | + | + | - | - | - | - || održati tijekom CaClz, ||||| | || 2 ||||| | Otkloniti || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | dietil eter, održati tijekom | - | + | - | - | - | - || NaOH, otkloniti ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | etil acetat (etil acetat + || || - || - || kiselina), stupnja čistoće reagensa, u skladu s GOST 22300-76, || ||| | || održati iznad Na CO i rektifitsi- ||||| | || 3. veljače ||||| | Rowan || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | natrij sulfata, bezvodnog kakvoće reagensa, od | + | + | + | + | - | - || GOST 4166-76 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | natrijev klorid, stupnja čistoće reagensa, prema GOST 4233-77 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | destilirana voda | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | ekstrakciju - 84% acetonitril u vo | + || de, 840 kubičnih metara. Pogledajte acetonitril dovo- | || dyatsya na 1 litru vode i polucha- | || etsya destilacijom s vodom vodenom | || a - acetonitril (1: 4) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 33% benzen u acetonitrilu - miješati | + | + | + | + | - | - || 30 cu. Vidi benzen i 60 kubičnih metara. Pogledajte aceton ||||| | || tonitrila (1: 2) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 20% acetonitrila u benzenu - 20 cu. | + | - | - | - | - | - || cm acetonitrila razrijedi benzen ||||| | || do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 2% octene kiseline u benzenu - 2 | - | - | + | - | - | - || cu. vidi razrijeđena octena kiselina ||||| | || benzen do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 5% octene kiseline u benzenu - 5 | - | + | - | - | - | - || cu. vidi razrijeđena octena kiselina ||||| | || benzen do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 10% etil acetata u benzenu - 10 cu. | - | + | - | + | - | - || cm acetat razrijedi s benzenom ||||| | || 100 cu. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 25% heksana u zračnom - 25 cu. vidi | - | + | - | - | - | - || heksana razrijedi s dietil eterom ||||| | || do 100 kubičnih metara. vidi ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- --- + + --- + | 10% aceton u diklormetanu - 10 cu. | - | + | - | - | - | - || razrijedi aceton cm 
Dijelite na društvenim mrežama: 

 
Povezan
 
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.
Medicinska zakon: zakon, dokumenti, odgovornosti, pravila, zakoni.